MicroRNA-195抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的體內(nèi)外研究.pdf

1、目的：觀察過表達(dá)miR-195對人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系SHG-44增殖的影響，并探討其調(diào)控SHG-44增殖能力的機(jī)制。
　　方法：利用脂質(zhì)體瞬時轉(zhuǎn)染miR-195mimics入人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系SHG-44，同時設(shè)立空白對照組和陰性對照組，流式細(xì)胞儀檢測轉(zhuǎn)染效率，實時熒光定量PCR檢測轉(zhuǎn)染前后miR-195的表達(dá)變化。分別從體外實驗和體內(nèi)實驗兩方面研究miR-195對人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系SHG-44增殖的影響。體外實驗通過CCK-8法檢測轉(zhuǎn)染

2、前后SHG-44細(xì)胞增殖能力的變化，使用流式細(xì)胞儀分析各組細(xì)胞周期的分布。體內(nèi)實驗通過構(gòu)建裸鼠皮下膠質(zhì)瘤模型，觀察過表達(dá)miR-195對膠質(zhì)瘤細(xì)胞成瘤能力的影響，記錄三組裸鼠腫瘤生長的體積變化，繪制生長曲線，剝離瘤體后稱重，進(jìn)行組織HE染色，通過免疫組化染色檢測Ki-67在瘤體中的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：1、流式細(xì)胞儀檢測示miR-195mimics與無義序列轉(zhuǎn)染率均達(dá)到90％以上；
　　2、實時熒光定量PCR檢測結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染

3、后miR-195的表達(dá)水平明顯升高，與空白對照組和陰性對照組比較升高約有6倍；3、細(xì)胞增殖能力通過CCK-8法檢測，經(jīng)過轉(zhuǎn)染miR-195mimics后細(xì)胞的增殖能力顯著下降，生長受到明顯抑制；4、過表達(dá)miR-195后，細(xì)胞的周期分布發(fā)生變化，G0/G1期細(xì)胞數(shù)量增多，S期細(xì)胞數(shù)量減少，G0/G1期向S期轉(zhuǎn)換受到阻滯；5、裸鼠成瘤實驗顯示，三組裸鼠成瘤率達(dá)到100%，miR-195組與其他兩組比較，瘤體生長速度減慢，瘤體體積減小、重量