c-Myc表達下調(diào)是與髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞周期阻滯和凋亡密切相關(guān)的分子事件.pdf

1、目的：1)探討原癌基因c-Myc在人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞系UW228-2和UW228-3細(xì)胞內(nèi)以及髓母細(xì)胞瘤和瘤周小腦的石蠟包埋組織微陣列中的表達情況；2)觀察白藜蘆醇對髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞系c-Myc表達的影響及其與細(xì)胞生長和存活的關(guān)系；3)分析c-Myc對細(xì)胞生長和細(xì)胞周期的作用。通過上述研究，進一步了解：白藜蘆醇抗髓母細(xì)胞瘤作用的分子機制和c-Myc與髓母細(xì)胞瘤生長、分化和凋亡之間的關(guān)系，以期加深對髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞分子生物學(xué)特點的認(rèn)識并為改善臨

2、床髓母細(xì)胞瘤的治療現(xiàn)狀提供新的實驗室指標(biāo)和理論根據(jù)。 方法：人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞系UW228-2和UW228-3培養(yǎng)于含10﹪進口胎牛血清的DMEM(Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium)培養(yǎng)基中，5x104/ml密度的細(xì)胞培養(yǎng)于Φ60和Φ100mm的培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)24小時。白藜蘆醇溶解于二甲基亞砜(DMSO，demethylsulfoxide)溶液中，以5mM的濃度儲存，使用前稀釋到100μM。采用Try

3、panBlue計數(shù)法檢測各實驗組中細(xì)胞的增殖活性，免疫細(xì)胞化學(xué)、免疫熒光、RT-PCR和Western-blot等方法系統(tǒng)地分析了各實驗組中c-Myc基因表達水平的改變及其與白藜蘆醇誘導(dǎo)的細(xì)胞分化和凋亡的關(guān)系。用從臨床收集的11例髓母細(xì)胞瘤及非瘤腦組織的石蠟包埋標(biāo)本制成石蠟組織微陣列，進行c-Myc的免疫組織化學(xué)染色。采用流式細(xì)胞儀檢測正常培養(yǎng)和經(jīng)白藜蘆醇處理的UW228-2細(xì)胞系細(xì)胞周期的變化及細(xì)胞凋亡情況。用陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將c-

4、Myc反義寡核苷酸導(dǎo)入UW228-2細(xì)胞以封閉基因表達，而后觀察細(xì)胞周期的變化、細(xì)胞凋亡的情況并與來自白藜蘆醇處理細(xì)胞系的相應(yīng)指標(biāo)加以對照。 結(jié)果：1)組織微陣列的免疫組化結(jié)果顯示：在11例人髓母細(xì)胞瘤樣本中，有8例(72.7﹪)表達c-Myc，其中4例有明顯的核移位現(xiàn)象；提示，c-Myc基因的表達尤其是核移位在髓母細(xì)胞瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用；2)免疫細(xì)胞化學(xué)、免疫熒光、RT-PCR和Western-blot等方法均揭示，經(jīng)白

5、藜蘆醇處理后的人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞系(UW228-2和UW228-3)在出現(xiàn)細(xì)胞分化和凋亡現(xiàn)象的同時，伴有c-Myc的表達下調(diào)；3)流式細(xì)胞技術(shù)的分析結(jié)果表明，經(jīng)白藜蘆醇處理的細(xì)胞出現(xiàn)了S期細(xì)胞周期阻滯；4)陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)的c-Myc反義寡核苷酸轉(zhuǎn)染技術(shù)可有效抑制c-Myc基因在靶細(xì)胞中的表達并使細(xì)胞出現(xiàn)凋亡和S期細(xì)胞周期阻滯的現(xiàn)象，但不誘導(dǎo)細(xì)胞出現(xiàn)分化樣的形態(tài)學(xué)改變。 結(jié)論：1)白藜蘆醇通過誘導(dǎo)細(xì)胞分化和凋亡發(fā)揮抗髓母細(xì)胞瘤的作

6、用；2)本實驗結(jié)果首次揭示，c-Myc表達的下調(diào)在白藜蘆醇的抗髓母細(xì)胞瘤作用中起關(guān)鍵作用，其結(jié)果可能是使細(xì)胞停滯在細(xì)胞周期的S期；3)c-Myc是髓母細(xì)胞瘤的S期促進因子并為該類細(xì)胞的生存所必需；4)白藜蘆醇誘導(dǎo)的髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞分化與c-Myc無直接關(guān)系，其機制有待進一步探討。c-Myc基因的過表達是髓母細(xì)胞瘤的惡性遺傳學(xué)標(biāo)記物并預(yù)示罹癌患者的不良預(yù)后。無毒副作用的白藜蘆醇對c-Myc表達的抑制作用提示了它在臨床治療髓母細(xì)胞瘤的應(yīng)用前景