β受體阻滯劑調(diào)控血管瘤細(xì)胞周期的研究.pdf

1、目的:1.觀(guān)察血管瘤增生速度及細(xì)胞周期蛋白的表達(dá)，探討血管瘤增生速度與細(xì)胞周期的關(guān)系。2.觀(guān)察不同年齡組兒童應(yīng)用β受體阻滯劑治療后，血管瘤的消退情況。3.研究不同種類(lèi)β受體阻滯劑對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞周期的調(diào)控。
　　方法:
　　1.天津市兒童醫(yī)院2010-2013年接收的300例血管瘤患兒中，符合手術(shù)要求并且家長(zhǎng)能夠配合隨訪(fǎng)的患兒45例。其中男20例，女25例，患兒年齡為9周～5歲，平均年齡1.8歲。其中9周～1歲20例，1～2歲

2、10例，3～4歲11例，4～5歲4例。定期隨訪(fǎng)，每周一次復(fù)診，為期一個(gè)月。觀(guān)察血管瘤直徑，顏色及張力變化，并計(jì)算血管瘤增殖率。一個(gè)月后手術(shù)切除，所有標(biāo)本均采用10％中性福爾馬林緩沖液固定，石蠟包埋。5μ m連續(xù)切片4張，行免疫組織化學(xué)法SP法染色檢測(cè)細(xì)胞周期蛋白(CyclinD1、CyclinA、CyclinB1、PHH3)的表達(dá)，研究血管瘤增生速度與細(xì)胞周期的關(guān)系。
　　2.從2012年4月至2013年3月我院收治的血管瘤患兒中

3、，按照Mulliken分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)選取符合研究要求的病例48例，其中男16例，女32例，年齡1個(gè)月～5歲，平均年齡2.6歲。其中位于頭頸部27例，四肢13例，軀干部8例，所有病例此前均未接受其他方法治療。結(jié)合研究一的結(jié)論，按年齡將病例分為增殖期組和非增殖期組。增殖期為0～1歲，非增殖期組為1～5歲。兩組各24例。均給予口服β受體阻滯劑鹽酸普萘洛爾片治療，2個(gè)月后觀(guān)察血管瘤消退情況，探討β受體阻滯劑起作用的時(shí)期。
　　3.傳代培養(yǎng)人臍靜

4、脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cell，HUVEC)，并通過(guò)測(cè)定血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞中人第八凝血因子相關(guān)抗原(FⅧRag)的存在，以證明培養(yǎng)的細(xì)胞確實(shí)為血管內(nèi)皮細(xì)胞;將培養(yǎng)的細(xì)胞分為四組，空白對(duì)照組，不添加任何藥物;普萘洛爾組、美托洛爾組、丁氧胺組分別添加普萘洛爾，美托洛爾和丁氧胺培養(yǎng)液，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期，ELISA免疫分析方法測(cè)定細(xì)胞周期蛋白激酶CDK4，探討這三種β受體阻滯劑對(duì)血管

5、瘤內(nèi)皮細(xì)胞周期的影響。
　　結(jié)果:
　　1.隨訪(fǎng)結(jié)果:9w～1歲其增殖率最大，為80％，顏色均為鮮紅色，4w時(shí)稍有加深，張力持續(xù)增大，觸之堅(jiān)韌;1～2歲增殖率為56％，顏色由紅色變?yōu)榘导t色，張力增加，觸之堅(jiān)硬;3～4歲為11％，暗紅色，肉眼觀(guān)察無(wú)明顯變化，張力增大不明顯，觸之一直較硬;4～5歲增殖率最小，為3％顏色有變淡趨勢(shì)，張力無(wú)明顯變化。免疫組化方法SP法染色可發(fā)現(xiàn)CyclinD1、CyclinA、CyclinB1及PP

6、H3均表達(dá)于內(nèi)皮細(xì)胞胞核中，且其表達(dá)水平隨著年齡的增大而呈下降趨勢(shì)。CyclinD1、CyclinA、CyclinB1及PPH3四者兩兩之間在血管瘤中的表達(dá)呈正相關(guān)（rs值分別為:0.68，0.53，0.56，0.62，P均＜0.05）。線(xiàn)性回歸相關(guān)性分析得出血管瘤增殖率與這四種周期蛋白表達(dá)的陽(yáng)性細(xì)胞指數(shù)均呈正相關(guān)。
　　2.口服鹽酸普萘洛爾片治療2個(gè)月后，其中增殖期組Ⅲ級(jí)8例，Ⅳ級(jí)12例，總有效率為83.4％;非增殖期組Ⅲ級(jí)2例

7、，Ⅳ級(jí)1例，總有效率為12.5％，兩組療效比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3.快速增殖的HUVEC經(jīng)不同的β受體阻滯劑普萘洛爾、美托洛爾、丁氧胺和正常培養(yǎng)基作用24h后，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期。結(jié)果為對(duì)照組G1期細(xì)胞為50.83％±6.32，S期細(xì)胞為40.67％±3.24，G2/M期細(xì)胞為10.87％±2.96，普萘洛爾組G1期細(xì)胞為75.32％±7.43，S期細(xì)胞為22.21％±3.58，G2/M期細(xì)胞為6.91

8、％±2.80，美托洛爾組G1期細(xì)胞為65.23％±3.78，S期細(xì)胞為28.34％±5.01，G2/M期細(xì)胞為8.12％±4.12，丁氧胺組G1期細(xì)胞為71.38％±5.69，S期細(xì)胞為25.47％±4.68，G2/M期細(xì)胞為7.92±2.98％。與對(duì)照組細(xì)胞相比，普萘洛爾、美托洛爾、丁氧胺三組細(xì)胞周期測(cè)定結(jié)果，其G1期細(xì)胞均明顯增加。測(cè)得對(duì)照組CDK4含量為0.85±0.06 ng/ml;普萘洛爾組CDK4含量為0.065±0.04

9、ng/ml;美托洛爾組CDK4含量為0.56±0.10ng/m;丁氧胺組CDK4含量為0.27±0.08 ng/ml。除對(duì)照組外，其余三組進(jìn)行組間相比較，普萘洛爾組的CDK4含量低于丁氧胺組，丁氧胺組的CDK4含量低于美托洛爾組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)
　　結(jié)論:
　　1.細(xì)胞周期蛋白的表達(dá)可用于判斷細(xì)胞增殖活性，其與血管瘤增生速度呈正相關(guān)。
　　2.β受體阻滯劑對(duì)增殖期組有效，可能通過(guò)調(diào)控細(xì)胞周期機(jī)制而起