天然小分子及N-糖基化對OATP2B1介導(dǎo)的攝取轉(zhuǎn)運的影響.pdf

1、有機陰離子轉(zhuǎn)運多肽（Orgainic antion transporting polypeptides，OATPs）是廣泛表達于人體組織器官細胞膜上的一類攝取轉(zhuǎn)運蛋白，能夠特異的轉(zhuǎn)運多種兩親性有機陰離子化合物、中性化合物甚至某些陽離子化合物進入細胞，被普遍認為是決定各種藥物、外源性化合物及毒素等吸收、分布、代謝及排泄的關(guān)鍵因素。OATP2B1是有機陰離子轉(zhuǎn)運多肽家族中的主要成員之一，表達于人體肝臟、小腸、腦、心、腎、胎盤及血小板等部位并

2、能特異性的轉(zhuǎn)運某些化合物包括內(nèi)源性化合物，如磺溴酞鈉、3-硫酸雌酮、硫酸脫氫表雄酮、牛磺膽酸鹽以及外源性藥物如非索非那定、格列本脲、他汀類藥物等。由于OATP2B1在人體的廣泛表達并能介導(dǎo)多種藥物轉(zhuǎn)運入細胞，因此具有非常重要的作用。
　　天然植物在臨床、飲食、養(yǎng)生等領(lǐng)域的使用與日俱增，加上天然植物的種類及其化學(xué)成分復(fù)雜，使得日常生活中OATPs底物藥與天然植物化學(xué)成分合用的情況成為可能。若某些天然植物成分對OATPs產(chǎn)生影響，可能

3、會引發(fā)OATPs介導(dǎo)的藥物-藥物相互作用。為了避免不良藥物相互作用的發(fā)生，同時保證藥物療效及用藥安全性，指導(dǎo)臨床合理用藥，本文就多種天然小分子對OATP2B1功能的影響展開了研究。通過LC-MS/MS檢測轉(zhuǎn)運進細胞內(nèi)3-硫酸雌酮（E3S）的量，我們對不同植物來源的多種天然小分子對OATP2B1介導(dǎo)的E3S轉(zhuǎn)運的影響進行了細胞水平上的研究。結(jié)果顯示，燈盞乙素（S-7-G）、桑皮黃素、甘草次酸及菊花梗葉黃酮提取物對 OATP2B1功能有明顯

4、的抑制作用，其IC50分別為2.0μM、1.6μM、13.3μM、2.25μg/mL，是本論文發(fā)現(xiàn)的OATP2B1抑制劑。同時，我們對槲皮素、甘草次酸及其糖苷化合物也進行了濃度依賴的抑制研究。結(jié)果表明，槲皮素及甘草次酸的糖苷化產(chǎn)物對OATP2B1的抑制作用與其苷元相比均減弱，IC50是苷元的5倍以上。
　　N-糖基化作為一種常見且多樣化的蛋白翻譯后調(diào)控方式，對蛋白質(zhì)在組織和細胞中的定位、功能、活性、壽命和多樣性起著非常重要的作用。

5、然而，N-糖基化如何對OATP2B1功能及表達產(chǎn)生影響以及OATP2B1有哪些可能的糖基化位點并未見報道。本文第二部分探究了N-糖基化對OATP2B1功能及表達的影響。通過生物信息學(xué)方法預(yù)測到了四個可能的OATP2B1 N-糖基化位點，并將糖基化位點的天冬酰胺殘基突變成谷氨酰胺殘基構(gòu)建去糖基化突變的OATP2B1，分別為N146Q、N176Q、N350Q、N538Q，進而在細胞水平對突變型和野生型OATP2B1進行了E3S轉(zhuǎn)運功能及表達

6、的比較和分析。實驗結(jié)果顯示，突變體N146Q和N350Q對E3S的攝取大大增加，而蛋白表達量并未增加；N176Q突變體E3S攝取活性和蛋白表達變化均不大；突變體N538Q E3S攝取量減少了44%，蛋白表達量也明顯降低。
　　本課題的兩部分研究使我們對OATP2B1轉(zhuǎn)運功能有了進一步的了解。天然小分子中OATP2B1新的抑制劑的發(fā)現(xiàn)提示我們，當服用OATP2B1底物藥時，應(yīng)注意避免與前述這些抑制劑同時服用，以避免不良藥物相互作用的