Oatp2介導(dǎo)的燈盞乙素肝臟轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制的研究.pdf

1、目的:從整體動(dòng)物水平和細(xì)胞水平研究燈盞乙素在肝臟中的攝取轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程,通過(guò)普伐他汀與燈盞乙素的相互作用研究,考察燈盞乙素在小鼠肝臟轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程中與oatp2的關(guān)聯(lián)性。通過(guò)對(duì)燈盞乙素在肝臟攝取轉(zhuǎn)運(yùn)的研究,進(jìn)一步明確燈盞乙素的藥代動(dòng)力學(xué)特點(diǎn),進(jìn)而豐富燈盞乙素藥理學(xué)特征,為燈盞乙素的臨床合理用藥提供理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 1.研究普伐他汀對(duì)燈盞乙素在小鼠肝臟攝取轉(zhuǎn)運(yùn)的影響。
　　 1.1建立燈盞乙素生物樣本的RP-HP

2、LC檢測(cè)方法。
　　 1.2采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì),將180只雄性昆明小鼠隨機(jī)分成A、B、C三組,每組60只,尾靜脈注射燈盞乙素50 mg/kg。A組:普伐他汀高劑量灌胃預(yù)處理+燈盞乙素,B組:普伐他汀低劑量灌胃預(yù)處理+燈盞乙素,C組:蒸餾水灌胃預(yù)處理+燈盞乙素。通過(guò)不同給藥方案,測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)的血漿藥物濃度及肝臟組織藥物濃度,考察普伐他汀對(duì)燈盞乙素的藥動(dòng)學(xué)及其肝臟組織攝取的影響。
　　 2.研究普伐他汀對(duì)燈盞乙素在原代小鼠肝

3、細(xì)胞中的攝取轉(zhuǎn)運(yùn)影響。
　　 2.1建立小鼠原代肝細(xì)胞的分離方法和小鼠肝細(xì)胞體外溫孵體系,建立燈盞乙素及普伐他汀細(xì)胞樣本的RP-HPLC檢測(cè)方法。
　　 2.2建立PCN誘導(dǎo)小鼠肝臟細(xì)胞oatp2高表達(dá)模型。
　　 2.3實(shí)驗(yàn)分為四組:a組:空白肝細(xì)胞懸液組,b組:經(jīng)PCN誘導(dǎo)的空白肝細(xì)胞懸液組,c組:經(jīng)PCN誘導(dǎo)的肝細(xì)胞懸液加入5βg/ml普伐他汀組,d組:經(jīng)PCN誘導(dǎo)的肝細(xì)胞懸液加入10βg/ml普伐他汀組。

4、四組肝細(xì)胞懸液中分別加入不同量的燈盞乙素,使各組肝細(xì)胞懸液中燈盞乙素的初始濃度分別為12βg/ml、24βg/ml。通過(guò)不同組新鮮肝細(xì)胞實(shí)驗(yàn),考察燈盞乙素的肝臟攝取情況,進(jìn)一步探討oatp2與燈盞乙素肝臟攝取轉(zhuǎn)運(yùn)之間的關(guān)系。
　　 結(jié)果:
　　 1.建立的血漿樣本、肝臟組織樣本及細(xì)胞樣本的RP-HPLC檢測(cè)方法符合生物樣本分析的要求。建立了成熟的小鼠原代肝細(xì)胞的分離方法和小鼠原代肝細(xì)胞溫孵體系,建立了小鼠在體誘導(dǎo)肝細(xì)胞高

5、表達(dá)oatp2的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?br>　　 2.整體實(shí)驗(yàn)結(jié)果:小鼠血漿中燈盞乙素的T1/2β(h)沒(méi)有差異,A、B、C組分別為0.439、0.426、0.435;CL(L/h/kg)有變化趨勢(shì),A、B、C組分別為2.005、2.546、3.045;A、B、C組的AUC(0-2)(mg/L·h)分別為24.290、19.197、16.169。普伐他汀灌胃能影響燈盞乙素的藥動(dòng)學(xué)特征,A組、B組小鼠燈盞乙素血漿中的AUC(O-2)(mg/L·h

6、)分別比C組增加了13.20％和40-56％。
　　 3.離體細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果:原代小鼠肝細(xì)胞懸液加入低劑量燈盞乙素時(shí),燈盞乙素5min時(shí)間點(diǎn)測(cè)定的消失率a、b、c、d組分別為:16.33±1.78％、21.58±1.08％、15.25±2.92％、12.25±1.33％;肝細(xì)胞懸液加入高劑量燈盞乙素時(shí),燈盞乙素5min時(shí)間點(diǎn)測(cè)定的消失率a、b、c、d組分別為:16.29±2.29％、20.37±1.17％、14.97±1.71％、