乳腺癌細胞系N-糖基化特征性糖鏈的分析.pdf

1、細胞質膜是細胞與外界進行物質與信息交換的場所，近年來發(fā)現，細胞表面糖蛋白是許多細胞質膜功能重要的執(zhí)行者，其上的糖鏈作為生物信息分子參與了細胞生物幾乎所有的生物學過程，如細胞識別、粘附與融合、信號轉導、免疫與應答等方面都與糖鏈有關。糖蛋白糖鏈結構的測定已成為臨床實驗室診斷疾病，尤其是腫瘤診斷的一個新的研究熱點。
　　本課題在基于DNA測序儀的熒光糖電泳（DSA-FACE）技術的基礎上，以乳腺癌細胞系為材料，比較分析了提取細胞膜蛋白和

2、細胞直接切糖技術兩種方法處理細胞后對細胞表面 N-糖鏈檢測的影響。結果顯示，完整細胞直接切糖法檢測到的糖鏈結構無論從數目、豐度均顯著優(yōu)于提取細胞膜蛋白后切糖的方法，該方法結合 DSA-FACE技術，是一種可以實現簡單、經濟、可靠的高通量細胞表面糖鏈結構檢測方法，適用于體外培養(yǎng)細胞表面 N-糖鏈的研究，并為高通量的分析細胞表面糖鏈的結構以及深入研究糖鏈生物學功能提供了新的思路。
　　利用建立的細胞直接進行切糖方法，分析了乳腺細胞系M

3、CF-10A及5種乳腺癌細胞系 BT-549、MDA-MB231、MDA-MB435S、MCF-7、Bcap37的細胞表面 N-糖鏈結構。發(fā)現正常乳腺細胞系與5種乳腺癌細胞系之間共同存在2種相同的N-糖鏈結構，并發(fā)現這2個N-糖鏈的含量在不同細胞系間存在差異。我們通過將每種乳腺細胞系分別與MCF-10A乳腺細胞系相比，尋找到每個乳腺癌細胞系各自的特異性 N-糖鏈結構，這些糖鏈的發(fā)現為研究來源不同的乳腺癌細胞系的生理學和病理狀態(tài)提供了新的

4、數據。
　　進一步將乳腺導管癌細胞系 BT-549與MCF-10A進行了對比分析，發(fā)現相同類型的細胞系的細胞表面 N-糖鏈結構比較接近，并篩選出1號糖峰為乳腺導管癌細胞系的特異性糖鏈。同時還比較了3種乳腺腺癌細胞系 MDA-MB231、MDA-MB435S、MCF-7與MCF-10A之間的N-糖鏈差異，發(fā)現相對于乳腺腺癌細胞系，5號峰是正常乳腺細胞系的特異性糖鏈。同時通過對處于不同臨床分期的3種乳腺腺癌細胞系內部之間的比較發(fā)現差異

5、較大，其中3號峰、6號峰僅在具有轉移特性的乳腺腺癌細胞系中檢測到，預示該峰可作為具有轉移特性的乳腺腺癌細胞系的特異性糖鏈。另外通過 MCF-10A與乳腺髓樣癌細胞系Bcap37比較發(fā)現，兩者細胞表面N-糖鏈結構差異顯著，其原因可能是由于細胞類型不同而導致這種差異。
　　本研究建立了結合 DSA-FACE技術的細胞表面直接切糖方法，在此基礎上，通過對MCF-10A與不同類型的乳腺癌細胞系細胞表面糖鏈的比較，發(fā)現了MCF-10A及乳腺