綿羊卵泡液雙向電泳圖譜構(gòu)建與差異蛋白質(zhì)組學(xué)分析.pdf

1、獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不包含為獲得新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)或其他教育單位的學(xué)位或證書而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示了謝意。研究生簽名：酒繭 時(shí)間： 加石年‘月／占日關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的說(shuō)明本人完全了解新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)

2、定，即：新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子文檔，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以公布( 包括刊登) 論文的全部或部分內(nèi)容。( 保密的學(xué)位論文在解密后應(yīng)遵守此協(xié)議)研究生簽名：導(dǎo)師簽名：汛岔 揣時(shí)間：沙- 易年占月，多日時(shí)間：加f 6 年易月，6 日綿羊卵泡液雙向電泳圖譜構(gòu)建與差異蛋白質(zhì)組學(xué)分

3、析捅要綿羊多年來(lái)一直是新疆畜牧養(yǎng)殖的主要畜種，除了推廣科學(xué)的飼養(yǎng)技術(shù)外，提高綿羊繁殖能力是促進(jìn)養(yǎng)羊業(yè)發(fā)展的主要途徑。綿羊的快繁技術(shù)體系中，獲得高質(zhì)量的卵母細(xì)胞及提高卵母細(xì)胞體外發(fā)育成熟的能力是體外胚胎生產(chǎn)技術(shù)的關(guān)鍵。卵泡液為卵母細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育提供了微環(huán)境，對(duì)卵泡液進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)方面的研究，有助于我們找出影響卵母細(xì)胞發(fā)育成熟的關(guān)鍵蛋白。本研究從樣品處理、凝膠濃度、膠條規(guī)格、上樣量以及染色方法等多方面優(yōu)化了影響綿羊卵泡液雙向電泳圖譜質(zhì)量的因

4、素，構(gòu)建了適合綿羊卵泡液的雙向電泳體系，為后續(xù)綿羊卵泡液蛋白質(zhì)的分離提供了良好的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)；以綿羊不同直徑卵泡中的卵泡液、激素誘導(dǎo)羔羊和成年羊發(fā)育卵泡液為樣品，利甩雙向電泳技術(shù)，研究了不同直徑卵泡液之間蛋白質(zhì)組的表達(dá)差異和激素誘導(dǎo)羔羊和成年羊發(fā)育卵泡液之間蛋白質(zhì)組的表達(dá)差異，切取差異明顯的蛋白點(diǎn)進(jìn)行酶解、質(zhì)譜鑒定和數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，通過(guò)查閱文獻(xiàn)分析這些蛋白與卵泡發(fā)育和卵母細(xì)胞成熟之間的內(nèi)在聯(lián)系，以期在蛋白質(zhì)水平上更加深入地了解綿羊的生殖發(fā)育機(jī)理

5、，從而改進(jìn)和推廣綿羊良種快繁技術(shù)，促進(jìn)養(yǎng)羊業(yè)的持續(xù)穩(wěn)定發(fā)展。本研究的結(jié)果如下：1 、綿羊卵泡液樣品處理采用P i e r c e ’mA l b 啪i n D e p l e t i o nK i t 去除高豐度白蛋白，使用1 2 ．5 ％的丙烯酰胺凝膠，1 8 c m 、p H 3 —1 0 的h 1 1 m o b i l i n e D 呵S 仃i p 膠條對(duì)卵泡液樣品進(jìn)行蛋白分離，當(dāng)上樣量為2 5 0 雌時(shí)得到的2 ．D E 圖

6、譜蛋白分離效果好，分辨率高，清晰度好。另外，樣品膠使用考馬斯亮藍(lán)膠體染色法，靈敏度高，與質(zhì)譜兼容性好，利于差異蛋白點(diǎn)的切取和鑒定；2 、對(duì)采集自綿羊卵巢 5 m m 不同直徑卵泡的三組卵泡液樣品采用雙向電泳技術(shù)進(jìn)行差異蛋白質(zhì)組學(xué)分析。結(jié)果顯示：不同直徑組卵泡液樣品的2 ．D E 圖譜間有2 9 8 個(gè)蛋白點(diǎn)匹配，通過(guò)含量計(jì)算及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，確定出1 7 個(gè)差異表達(dá)蛋白點(diǎn)，經(jīng)質(zhì)譜分析有7 個(gè)差異蛋白被鑒定，分別是：微管蛋白B 2 A 鏈、叢

7、生蛋白、原肌球蛋白一3 、a 1 - 酸性糖蛋白、p 一肌動(dòng)蛋白和白蛋白( 其中有兩個(gè)蛋自點(diǎn)被鑒定為白蛋白) 。并且，這6 個(gè)差異蛋白在直徑< 3 m m 卵泡液組的表達(dá)量均高于其他兩組：3 、使用激素誘導(dǎo)羔羊與成年羊發(fā)育卵泡液樣品，通過(guò)雙向電泳技術(shù)進(jìn)行差異蛋白質(zhì)組學(xué)分析，結(jié)果顯示：激素誘導(dǎo)羔羊與成年羊發(fā)育卵泡液樣品的2 ．D E 圖譜間有3 8 4 個(gè)蛋白點(diǎn)匹配，通過(guò)含量計(jì)算及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，確定出1 6 個(gè)差異表達(dá)蛋白點(diǎn)，經(jīng)質(zhì)譜分