兔上肢骨折愈合的蛋白質(zhì)組學(xué)雙向電泳分析.pdf

1、目的：利用雙向電泳技術(shù)，獲得兔骨折愈合不同時(shí)期(2w，4w，8w，12w)的骨痂蛋白和正常骨組織的蛋白質(zhì)雙向電泳圖譜，動(dòng)態(tài)的觀察骨痂組織中蛋白質(zhì)含量、種類與正常骨組織的差異，找出表達(dá)差異的蛋白質(zhì)點(diǎn)，為后續(xù)進(jìn)行質(zhì)譜分析，鑒定出參與骨折愈合過(guò)程的特異性蛋白質(zhì)奠定基礎(chǔ)。
　　 方法：選擇新西蘭大白兔40只，體重2-2.2kg，隨機(jī)分成4組，每組10只。建立兔橈骨的骨折模型，分別于2w、4w、8w、12w處死動(dòng)物，截取骨痂組織及對(duì)側(cè)正常

2、骨組織。使用蛋白質(zhì)裂解液，以正常骨組織為對(duì)照組，2w、4w、8w、12w的骨痂蛋白為實(shí)驗(yàn)組，分別提取各組骨組織的總蛋白，檢測(cè)各組蛋白提取液的濃度，用SDS-PAGE凝膠電泳初步觀察，雙向凝膠電泳分離蛋白質(zhì)和考馬斯亮藍(lán)染色后掃描獲取高清晰的蛋白質(zhì)圖譜，再經(jīng)計(jì)算機(jī)軟件對(duì)比分析，得到表達(dá)差異的蛋白質(zhì)點(diǎn)。
　　 結(jié)果：各實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的雙向凝膠電泳圖譜分辨率高，重復(fù)性好。骨折愈合不同時(shí)期獲得的蛋白質(zhì)點(diǎn)個(gè)數(shù)：2周(843+29)，4周(7

3、27±36)，8周(785±30)，12周(737±42)，對(duì)照組蛋白點(diǎn)數(shù)為(710±25)。以對(duì)照組的雙向電泳圖譜為比較對(duì)象，實(shí)驗(yàn)組匹配蛋白點(diǎn)相對(duì)含量的比值大于2或者小于0.5則認(rèn)為是差異蛋白質(zhì)點(diǎn)，從而得出蛋白質(zhì)差異點(diǎn)數(shù)目是：22(2周)，26(4周)，24(8周)，21(12周)。
　　 結(jié)論：本研究建立了分辨率高，且重復(fù)性好的兔骨折愈合蛋白質(zhì)組學(xué)雙向凝膠電泳圖譜，發(fā)現(xiàn)了許多在骨折愈合過(guò)程中與對(duì)照組相比表達(dá)差異的蛋白質(zhì)。為進(jìn)