低溫脅迫下菊花蛋白質組的雙向電泳分析與質譜鑒定.pdf

1、本研究利用雙向電泳和質譜技術對抗寒性不同的菊花品種進行了蛋白質組學的比較分析，以探索菊花的抗寒機制。實驗選擇不同抗寒性的菊花品種——北京小菊(Dendranthemacv.pekinense，0＃)和地被菊(Dendranthema×morifolium，3＃)，在4℃控溫生長箱中(10h光照)低溫處理0hr、2hr、4hr、12hr、1d、2d、3d后分別取葉片，用Tris飽和酚法提取總蛋白，進行單向電泳和雙向電泳分析。對樣品制備、蛋

2、白溶解等技術環(huán)節(jié)進行了優(yōu)化和改進，摸索了一種適合于菊花葉片全蛋白的提取方法，解決了菊花葉片中多糖、脂類、色素等對雙向電泳嚴重干擾的問題，同時確定了一種有效的蛋白質裂解液(7mol·L-1尿素、2mol·L-1硫脲、4％CHAPS、5mmol·L-1DTT)。葉片全蛋白采用pH3-10的線性IPG干膠條進行分離，經考馬斯亮蘭染色后，利用ImageMaste-2DElite圖象分析軟件進行處理，獲得了重復性好、分辨率高的蛋白質雙向電泳圖譜，

3、分別得到了500～800多個可識別的蛋白質斑點；通過斑點配比，獲得了0＃不同時間低溫處理下的差異蛋白54個，3＃不同時間低溫處理下的差異蛋白52個，以及這兩種耐寒性不同的菊花品種在相同低溫處理時間下的差異蛋白7個；分別對這些差異蛋白進行肽質量指紋圖譜分析，共獲得了63個較好的肽質量指紋圖譜。鑒定了12個蛋白差異點，分別為多聚半乳糖醛酸酶、甘氨酸結合蛋白、果糖1，6-二磷酸醛縮酶、轉錄因子MYB家族、鈣調素蛋白受體激酶、磷酸甘油酸變位酶、