磷脅迫下油菜子葉、莖及其根系分泌蛋白的雙向電泳分析.pdf

1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterm‘11”‘▲1‘1wodimensionalElectrophoreslsAnalyslsoISrasslcanapusandRootSecretedProteinsunderPhosphorusDeficencyAuthor：YinyinNiuSupervisor：ProfXinZangCellbiology一一Depa

2、rtmentofBiologicalEngineering一一一一May2013摘要摘要磷素是植物所必需的維持其生命特征的主要營養(yǎng)元素之一，土壤有效磷缺乏是世界范圍內影響農作物產量和品質的主要非生物脅迫因子之一。油菜作為中國油料供應的重要經濟作物之一，它的高產量和高品質一直是人們關注的焦點。然而，油菜受到磷缺乏的影響，很難發(fā)揮其優(yōu)勢潛力，鑒于此種狀況，人們通過大量施肥來解決磷缺乏的問題，同時，也帶來了一系列的環(huán)境污染問題，這極其不符合可

3、持續(xù)發(fā)展戰(zhàn)略的要求。因此，開展油菜響應磷脅迫機制的研究，挖掘油菜自身高效利用磷營養(yǎng)的種質資源，已成為目前研究的重點和熱點。傳統(tǒng)的研究方法多集中在基因領域，難以揭示油菜響應磷脅迫的綜合機理。隨著后基因組學時代的來臨，蛋白質組學應運而生，蛋白質是生物生命現(xiàn)象和生理功能的直接執(zhí)行者，所有生物的細胞、器官和組織的生命活動都是由組成其各個部分的蛋白質所支撐的。因此，可以利用蛋白質組學技術來研究磷脅迫下油菜的變化機制。本研究以甘藍型油菜鼎油雜4號為

4、試驗材料，利用缺磷營養(yǎng)液模擬磷脅迫，在前人建立的自制管狀膠雙向電泳技術體系的基礎上，建立了根系分泌蛋白的提取體系，并進一步研究了油菜響應磷脅迫的幼苗子葉、莖以及根系分泌蛋白的雙向電泳圖譜差異表達，期望有助于后續(xù)的磷脅迫下油菜幼苗相關分子機理的研究。主要研究結論如下：(1)、初步建立了適用于研究油菜根系分泌蛋白的無菌水培體系。本研究在傳統(tǒng)的水培體系基礎上，對培養(yǎng)儀器和培養(yǎng)液進行高溫滅菌，實驗操作在單人雙面凈化工作臺上進行，使其達到無菌狀態(tài)

5、，同時采用微生物檢測技術對培養(yǎng)液進行無菌檢測，確保根系分泌蛋白的提取完全無菌，為后續(xù)實驗的進行提供了優(yōu)良的實驗材料。(2)、初步建立了根系分泌蛋白的提取方法。本實驗在傳統(tǒng)的TCA丙酮蛋白提取法的基礎上，經過改進優(yōu)化，初步建立了一種油菜根系分泌蛋白的提取方法。在蛋白質的提取過程中增加了低速離心除雜和脫氧膽酸鈉與TCA協(xié)助浸提兩個新的步驟，提取的蛋白經過裂解定量以及雙向電泳技術，獲取了較好的雙向電泳結果，這表明，此方法適用于根系分泌蛋白的提