梅花鹿鹿茸雙向電泳體系建立及蛋白質(zhì)組學(xué)的研究.pdf

1、梅花鹿(Cervus nippon Temminck)位居動(dòng)物藥之首,鹿茸以其神奇的藥用價(jià)值和滋補(bǔ)功能在中藥材領(lǐng)域發(fā)揮著不可代替的作用。鹿茸中成分至今不清,嚴(yán)重制約了梅花鹿產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。另外,我國(guó)鹿茸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系缺失,致使鹿產(chǎn)品的國(guó)際競(jìng)爭(zhēng)力逐年下降。為此,如何利用現(xiàn)代生物技術(shù)從分子水平分析鹿茸成分,建立鹿茸質(zhì)量評(píng)價(jià)體系,已經(jīng)成為梅花鹿產(chǎn)業(yè)發(fā)展急需解決的問(wèn)題。本實(shí)驗(yàn)篩選出鹿茸全蛋白最佳提取方法,建立了梅花鹿鹿茸雙向電泳體系;利用蛋白質(zhì)組學(xué)方

2、法分析了二杠梅花鹿茸蛋白質(zhì)組成,為鹿茸系列產(chǎn)品的深度開(kāi)發(fā)提供了理論依據(jù)。
　　首先,建立梅花鹿鹿茸雙向電泳體系,篩選最適鹿茸全蛋白提取方法和電泳參數(shù),以便得到清晰的蛋白圖譜。結(jié)果表明裂解液法得到的蛋白樣品濃度較高,且樣品的雙向電泳圖譜蛋白點(diǎn)數(shù)量多、圓滑、分辨率高,圖譜橫豎紋少。
　　其次,利用PDQuest軟件檢測(cè)圖譜上的蛋白點(diǎn),切取目的蛋白后利用MALDI-TOF/TOF質(zhì)譜技術(shù)鑒定并 NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)搜索比對(duì),采用打分方式

3、確定蛋白鑒定是否成功。對(duì)鑒定成功的蛋白質(zhì)進(jìn)行功能分析,尋找與鹿茸生長(zhǎng)有關(guān)的蛋白和具有保健作用的藥效蛋白。在蛋白圖譜上共檢測(cè)到460個(gè)蛋白點(diǎn),鑒定成功177種單一蛋白。其中結(jié)構(gòu)蛋白31種,具有酶活性的蛋白65種,抑制劑和激活劑5種,信號(hào)通道蛋白和分泌蛋白30種,免疫蛋白3種,與蛋白折疊有關(guān)的蛋白13種,與復(fù)制轉(zhuǎn)錄及翻譯有關(guān)的蛋白14種,血液蛋白10種,與腫瘤發(fā)生有關(guān)的蛋白6種。
　　最后,篩選得到24種與鹿茸生長(zhǎng)發(fā)育和保健作用有關(guān)的

4、蛋白。推測(cè)中心體肌動(dòng)蛋白、波形蛋白、ATP合成酶、α-烯醇化酶、丙酮酸激酶、線(xiàn)粒體檸檬酸合成酶、蘋(píng)果酸脫氫酶、延胡索酸水解酶、乙醇脫氫酶、肌紅蛋白、血紅蛋白、真核生物延伸因子、前體mRNA加工因子、tRNA合成酶等14種蛋白與鹿茸的生長(zhǎng)發(fā)育有關(guān);熱應(yīng)激蛋白與鹿茸促進(jìn)組織傷口愈合有關(guān);肌腱蛋白與促進(jìn)神經(jīng)再生有關(guān);鈣網(wǎng)蛋白、膠原蛋白、鈣調(diào)素結(jié)合蛋白、骨連接蛋白、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣結(jié)合蛋白、FK506結(jié)合蛋白等6種蛋白與鹿茸的骨化有關(guān);含錳超氧化物歧化