腦脊液雙向凝膠電泳方法的建立及帕金森病腦脊液蛋白質(zhì)組學(xué)的初步研究.pdf

1、帕金森病(PD)是一種以中腦黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元變性、缺失，以靜止性震顫、運(yùn)動(dòng)遲緩、肌強(qiáng)直、姿勢(shì)步態(tài)異常為主要特征的神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病。目前認(rèn)為可能由多種基因突變、環(huán)境毒素、年齡老化共同作用的結(jié)果。但引起PD的確切病因和發(fā)病機(jī)理迄今仍不清楚。隨著蛋白質(zhì)組學(xué)的發(fā)展，有關(guān)神經(jīng)系統(tǒng)的腦脊液蛋白質(zhì)組學(xué)也漸漸展開(kāi)，但帕金森病腦脊液研究較少，而且腦脊液為高鹽低蛋白體液，其中高豐度蛋白(白蛋白，IgG等)占據(jù)絕大部分，使具有重要生理作用的低豐度蛋白檢出下降

2、，分辨率低。如何改善腦脊液樣品處理，提高分辨率和重復(fù)性，建立穩(wěn)定的腦脊液雙向凝膠電泳技術(shù)是尚待解決的問(wèn)題。 目的：探索去除腦脊液高豐度蛋白的方法，建立雙向凝膠電泳(2-DE)適宜的實(shí)驗(yàn)方案；比較PD患者和對(duì)照組腦脊液2-DE圖譜，尋找有意義的差異蛋白。為腦脊液蛋白質(zhì)組學(xué)提供技術(shù)平臺(tái)，并為探索帕金森病發(fā)病機(jī)制提供新的思路。 方法： 1．建立穩(wěn)定的腦脊液雙向凝膠電泳體系 ①用Oasis HLB柱層析分餾將腦脊

3、液中高豐度蛋白去除，過(guò)濾液凍干，丙酮沉淀去鹽濃縮，提取腦脊液中低豐度蛋白。②以固相pH梯度等電聚焦(IPG-IEF)為第一向，垂直平板十二烷基磺酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)為第二向進(jìn)行2-DE；③用銀染法對(duì)電泳后的凝膠染色，采集凝膠圖像并進(jìn)行圖像分析。 2．根據(jù)已建立的實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行帕金森患者腦脊液蛋白質(zhì)組學(xué)研究，尋找差異點(diǎn)，并行質(zhì)譜鑒定。 結(jié)論： 1、運(yùn)用Oasis HLB過(guò)濾柱層析分餾可以有效地去