綿羊肺炎支原體標準株Y98蛋白質(zhì)組雙向電泳圖譜的構(gòu)建及其抗原性研究.pdf

1、羊支原體性肺炎是山羊和綿羊最為常見的一種呼吸道疾病,但由于它的死亡率比較低,一直以來并不引起人們的重視,從近年來的研究發(fā)現(xiàn),該病的死亡率呈上升趨勢,尤其是羔羊,在世界上多個國家地區(qū)普遍流行,造成巨大經(jīng)濟損失,對養(yǎng)羊業(yè)危害嚴重[1],同時國內(nèi)外對于綿羊肺炎支原體的致病機理、分子生物學等方面的研究還進展緩慢.該文以綿羊肺炎支原體標準株Y98和絲狀支原體絲狀亞種標準株P(guān)G3為試驗材料,建立了針對這兩種支原體蛋白質(zhì)組學研究的雙向電泳(2-DE)

2、及其相關(guān)技術(shù)體系,并通過SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法(SDS-PAGE)免疫印跡試驗對綿羊肺炎支原體標準株Y98的抗原性進行了初步探索,旨在從構(gòu)建綿羊肺炎支原體總蛋白的蛋白質(zhì)組學雙向電泳圖譜入手,為今后肽質(zhì)量指紋圖制備及抗原基因的獲得等分子生物學研究打下基礎(chǔ),為將來綿羊肺炎支原體基因工程疫苗的研究作鋪墊,從而希望能從根本上控制該病的傳播與流行.SDS-PAGE結(jié)果顯示:綿羊肺炎支原體標準株Y98全蛋白的分子量范圍為14kD~100kD,

3、主要的9種蛋白質(zhì)帶分子量分別為100kD,97kD,82kD,74kD,48kD,40kD,35kD,22kD,18kD;綿羊肺炎支原體分離株HD-1全蛋白的分子量范圍為14kD~100kD,主要的10條蛋白質(zhì)帶分子量分別為100kD,97kD,82kD,74kD,48kD,44kD,40kD,35kD,22kD,18 kD,與Y98蛋白帶基本相同;絲狀支原體絲狀亞種標準株P(guān)G3全蛋白的分子量范圍為15kD~123kD,主要的11條蛋白

4、多肽帶分子量分別為123kD,105kD,73kD,70kD,62k D,38kD,30.6kD,29kD,27.8kD,23.5kD,15.6kD,與Y98和HD-1的蛋白帶差異明顯;肺炎支原體標準株FH全蛋白的分子量范圍為14kD~100kD,主要的9條蛋白多肽帶分子量分別為97kD,79.4kD,75.9kD,65kD,63kD,53.6kD,38.2kD,30,17kD.可見HD-1和Y98菌體蛋白分子量基本相同,只有少數(shù)多肽不

5、同,它們與MP的菌體蛋白也有很多相同的條帶,但是它們與PG3的菌體蛋白相差很大.蛋白質(zhì)組學雙向電泳圖譜顯示:綿羊肺炎支原體標準株Y98株菌體蛋白雙向電泳銀染圖譜出現(xiàn)288±9個蛋白質(zhì)點,分子量范圍為14kD~100kD,等電點范圍主要為pI 4.436~7.164,說明Y98株菌體蛋白主要為偏酸性蛋白;絲狀支原體絲狀亞種標準株P(guān)G3菌體蛋白雙向電泳銀染圖譜出現(xiàn)243±11個蛋白質(zhì)點,分子量范圍為14kD-100kD,等電點范圍主要為pI

6、 4.213~7.987,同樣說明PG3菌體蛋白中偏酸性蛋白占主導;利用Image Mster 2D Elite 3.01圖像分析軟件分析Y98總蛋白雙向電銀染圖譜和PG3雙向電泳銀染圖譜,我們發(fā)現(xiàn)兩者具有21個相近的蛋白質(zhì)點,可能為兩者的共同蛋白質(zhì).綿羊肺炎支原體標準株Y98全蛋白免疫印跡試驗初步確定Y98具有抗原性的四種蛋白為分子量分別為74.2kD、53.6kD、40.5kD和26.5kD的蛋白質(zhì),可能為Y98的主要抗原蛋白,進一