替米沙坦對(duì)OLFTF大鼠皮下和內(nèi)臟脂肪組織前炎癥因子表達(dá)的影響及其部位差異性.pdf

1、目的：
　　 觀察替米沙坦對(duì)長期高脂飼養(yǎng)OLETF(OtsukaLong-EvansTokushimaFatty)大鼠胰島素敏感性及2型糖尿病(Type2diabetesmellitus，T2DM)發(fā)病的早期干預(yù)作用，研究阻斷腎素血管緊張素系統(tǒng)(Renin-angiotensinsystem，RAS)對(duì)大鼠皮下和內(nèi)臟脂肪組織中脂肪細(xì)胞因子脂聯(lián)素及其受體、瘦素、MCP-1、IL-6、TNF-α、PPARγ1、PPARγ2、AT1及

2、AT2等表達(dá)的調(diào)控作用及其部位差異性，探討脂肪組織局部RAS與胰島素抵抗的關(guān)聯(lián)，及替米沙坦阻斷RAS、改善胰島素抵抗進(jìn)而延緩高脂飼養(yǎng)OLETF大鼠T2DM發(fā)生的機(jī)制。
　　 內(nèi)容：
　　 4周齡雄性O(shè)LETF大鼠50只為實(shí)驗(yàn)組，選擇性別、年齡匹配的正常非糖尿病LETO(Long-evanstokushimaotsuka)大鼠12只為對(duì)照組，OGTT結(jié)果證實(shí)，22周時(shí)尚未發(fā)生糖尿病。然后隨機(jī)分為替米沙坦5mg·kg-1·d

3、-1（O-T組）、低劑量替米沙坦0.5mg·kg-1·d-1（O-TL組）、吡格列酮10mg·kg-1·d-1（O-P組）、二甲雙胍100mg·kg-1·d-1（O-M組）和無干預(yù)（O-C）對(duì)照組。22周齡開始給予藥物干預(yù)，給藥方法為每日1次定時(shí)灌胃。自20周齡始每兩周稱重、測(cè)定血糖，并測(cè)定血壓變化。48周齡時(shí)行高胰島素正葡萄糖鉗夾試驗(yàn)，用3％烏拉坦(0.3ml/100g體重)腹腔麻醉，取血后處死大鼠，分別取皮下及睪周脂肪組織，液氮凍存

4、備用。檢測(cè)皮下和睪周脂肪組織中脂聯(lián)素、瘦素、MCP-1、TNF-α等前炎性因子等基因和蛋白表達(dá)水平，并觀察其形態(tài)學(xué)改變。
　　 方法：
　　 1.實(shí)驗(yàn)方法:①富含飽和脂肪酸的飼料喂養(yǎng)OLETF大鼠，建立T2DM模型;②ELISA法測(cè)定血清中脂聯(lián)素、瘦素、MCP-1、TNF-α、IL-6等的含量。酶法測(cè)定TC、TG、LDL-C、HDL-C等水平;③采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)皮下和睪周脂肪組織中脂聯(lián)素及其受體、瘦素、MCP-

5、1、IL-6、TNF-α及PPARγs等mRNA的表達(dá)水平;④WesternBlotting法檢測(cè)皮下和睪周脂肪組織中脂聯(lián)素、瘦素、MCP-1、TNF-α、IkB-α、NFκBp50等蛋白表達(dá)水平;⑤皮下和睪周脂肪HE染色，光鏡下觀察脂肪細(xì)胞形態(tài)改變。
　　 2.統(tǒng)計(jì)方法:所有數(shù)據(jù)處理采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包。計(jì)量資料以(x)±s表示。為排除血壓因素對(duì)統(tǒng)計(jì)結(jié)果的影響，計(jì)量資料均數(shù)比較將收縮壓和舒張壓作為協(xié)變量進(jìn)行協(xié)方差分析

6、。糖尿病發(fā)病率比較用x2檢驗(yàn)(Fsher'sExactTest)。組間比較經(jīng)方差齊性檢驗(yàn)，方差齊者兩兩比較使用LSD法，方差不齊者使用Dunnett'sT3法。HOMA-IR與脂肪細(xì)胞因子的相關(guān)性采用Spearman秩相關(guān)分析。糖代謝異常的影響因素分析采用二元Logistic回歸。
　　 結(jié)果：
　　 1.與LETO組相比，O-C組大鼠體重明顯增高，O-T組大鼠體重較O-C組無明顯差異（P＞0.05），但內(nèi)臟脂肪指數(shù)卻明

7、顯低于O-C組(P＜0.05)。而O-P組大鼠體重從30周齡至48周齡持續(xù)增高，且均顯著高于包括O-C組在內(nèi)其他各組(P＜0.05)。
　　 2.O-C組血清FPG、FINS、FFA、TC、LDL-C、HOMA-IR以及24小時(shí)尿量和尿糖均明顯增高，T2DM發(fā)病率達(dá)90％。而上述糖脂代謝指標(biāo)在O-T組均出現(xiàn)明顯降低，且OGTT各時(shí)點(diǎn)血糖、HOMA-IR也較O-C組顯著降低(P＜0.05)，T2DM發(fā)病率也較O-C組明顯降低(x2

8、=5.495，P=0.019)。
　　 3.O-C組大鼠前炎性脂肪細(xì)胞因子TNF-α、MCP-1和瘦素?zé)o論在血清還是皮下和內(nèi)臟脂肪組織中mRNA與蛋白表達(dá)水平上均明顯升高，而脂聯(lián)素和PPARγ的表達(dá)明顯降低。替米沙坦和吡格列酮下調(diào)皮下和內(nèi)臟脂肪組織中瘦素和TNF-α的表達(dá)并降低血清瘦素水平，但僅替米沙坦明顯下調(diào)血清TNF-α、IL-6的濃度。替米沙坦、吡格列酮和二甲雙胍均可下調(diào)皮下脂肪組織MCP-1的基因與蛋白表達(dá)，但僅有替米沙

9、坦可明顯下調(diào)內(nèi)臟脂肪組織MCP-1的基因表達(dá)并降低其血清濃度。
　　 4.O-C組皮下和內(nèi)臟脂肪組織中AT1的mRNA水平明顯增高，而O-P組、O-T組及O-TL組AT1的表達(dá)均出現(xiàn)明顯下調(diào)，且O-P組及O-T組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。O-T組AT2mRNA水平明顯高于除O-TL組外的其它各組（P＜0.01），且只有替米沙坦明顯上調(diào)皮下和內(nèi)臟脂肪AdipoR1&R2的表達(dá)。O-P組皮下脂肪組織PPARγ1和PPARγ2的表達(dá)均明顯

10、高于O-C組，O-T組內(nèi)臟脂肪組織中PPARγ1和PPARγ2的表達(dá)明顯上調(diào)，O-T組皮下脂肪中PPARγ2的表達(dá)也明顯升高，且O-T組與O-P組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。O-C組脂肪組織細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，排列紊亂。與O-C組比較，O-P組、O-M組、O-T組及O-TL組的脂肪細(xì)胞面積明顯分別減小58％、38％、56％和19％（P＜0.01），且形態(tài)排列趨于規(guī)則。
　　 5.相關(guān)分析結(jié)果顯示，SBP、DBP與HOMA-IR無相關(guān)關(guān)系，

11、提示替米沙坦的降壓和改善胰島素抵抗的作用并不一致，其改善胰島素抵抗的作用并不依賴于血壓水平的變化。HOMA-IR與內(nèi)臟脂肪組織中PPARγ2的mRNA表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(ρ=-0.369，P=0.021)，而與內(nèi)臟脂肪中PPARγ1、皮下脂肪組織中PPARγ1、PPARγ2的mRNA表達(dá)均無相關(guān)性(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.通過長期高脂喂養(yǎng)自發(fā)2型糖尿病OLETF大鼠模型，具有高血糖癥、輕度肥胖、糖脂代謝紊

12、亂、顯著胰島素抵抗等T2DM的特征，表明T2DM動(dòng)物模型建立成功。
　　 2.ARB替米沙坦可以減少大鼠內(nèi)臟脂肪、改善糖脂代謝紊亂和胰島素抵抗、降低T2DM的發(fā)病率，且其改善胰島素抵抗與其改善血清和脂肪組織，尤其是內(nèi)臟脂肪組織中的脂肪細(xì)胞因子表達(dá)有關(guān)，而與其降壓效應(yīng)無關(guān)。
　　 3.替米沙坦通過IKK/NFκB通路對(duì)脂聯(lián)素、IL-6、TNF-α及MCP-1等脂肪因子表達(dá)分泌譜進(jìn)行調(diào)控，改善局部炎癥微環(huán)境。
　　

13、4.替米沙坦對(duì)脂肪組織中炎癥因子的調(diào)控更多地體現(xiàn)出較強(qiáng)的內(nèi)臟優(yōu)勢(shì)，而吡格列酮?jiǎng)t表現(xiàn)為皮下優(yōu)勢(shì)，推測(cè)此與血管緊張素受體及PPARγ的分布部位特異性有關(guān)。
　　 5.替米沙坦改善脂肪組織炎癥狀態(tài)，與其具有ARB/PPARγ配體雙重效應(yīng)有關(guān)，可通過兩條途徑:一方面可以通過拮抗AT1R阻斷AngⅡ的生物學(xué)效應(yīng)，抑制脂肪組織RAS激活對(duì)胰島素抵抗發(fā)生發(fā)展的促進(jìn)作用，另一方面，作為部分PPARγ激動(dòng)劑激活PPARγ，參與調(diào)節(jié)與糖、脂代謝相關(guān)