替米沙坦對(duì)高脂飼養(yǎng)OLETF大鼠糖尿病的預(yù)防作用和對(duì)脂肪組織MCP-1表達(dá)的影響.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)通過(guò)高脂飼養(yǎng)OLETF(otsuka long-evans tokushima fatty，OLETF)大鼠建立2型糖尿病動(dòng)物模型。旨在探討：1.血管緊張素Ⅱ受體1拮抗劑(angiotensinⅡ type1 receptor blocker，ARB)類(lèi)藥物替米沙坦對(duì)高脂飼養(yǎng)大鼠2型糖尿病的預(yù)防作用和對(duì)糖脂代謝的影響；2.觀察單核細(xì)胞趨化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1，MCP-

2、1)在高脂喂養(yǎng)大鼠血清和睪周脂肪組織中的表達(dá)以及在2型糖尿病中的作用；3.替米沙坦對(duì)高脂飼養(yǎng)OLETF大鼠胰島素敏感性和2型糖尿病發(fā)病率的影響并探討其是否通過(guò)MCP-1來(lái)發(fā)揮降低糖尿病發(fā)病率的作用。
　　 方法：4周齡雄性O(shè)LETF大鼠30只，同系正常對(duì)照LETO(long-evans tokushimaotsuka)大鼠12只于清潔級(jí)環(huán)境以普通飼料適應(yīng)性飼養(yǎng)4周。OLETF大鼠8周齡時(shí)給予高脂飼料喂養(yǎng)。至16周齡，進(jìn)行口服葡萄

3、糖耐量實(shí)驗(yàn)(OGTT)，各組大鼠均未出現(xiàn)糖耐量異常，根據(jù)OGTT2h血糖和體重將OLETF大鼠隨機(jī)分為3組，每組10只。22周齡時(shí)再次復(fù)查OGTT，42只大鼠均未發(fā)生糖尿病，開(kāi)始予以藥物干預(yù)。根據(jù)給予藥物的不同分為：(1)替米沙坦(T)組：高脂飲食加替米沙坦(5 mg·kg-1·d)；(2)二甲雙胍(M)組：高脂飲食加二甲雙胍(100mg·kg-1·d)；(3)高脂對(duì)照(O)組：高脂飲食的OLETF大鼠，無(wú)干預(yù)；(4)非糖尿病對(duì)照(NC

4、)組：同系非自發(fā)糖尿病LETO大鼠12只。48周齡時(shí)O組大鼠80％發(fā)生糖尿病終止實(shí)驗(yàn)。全部大鼠禁食12小時(shí)，股動(dòng)脈放血處死，留取動(dòng)脈血5 ml離心分離血清，留取睪周脂肪組織約250 mg備用。觀察：1.體重變化：自20周齡始每?jī)芍芊Q(chēng)重一次。2.處死后血清指標(biāo)：生化法測(cè)定血清游離脂肪酸、總膽固醇、甘油三脂、低密度脂蛋白膽固醇和高密度脂蛋白膽固醇等代謝指標(biāo)；葡萄糖氧化酶法測(cè)定空腹血漿血糖；EIJSA法測(cè)定空腹胰島素水平；胰島素抵抗指數(shù)(HO

5、MA-IR)=(FINS×FBG)/22.5，β細(xì)胞功能指數(shù)(HOMA-β)=20×FINS/(FBG-3.5)；ELISA法測(cè)定血清MCP-1水平。3.MCP-1基因及蛋白表達(dá)：RT-PCR法檢測(cè)睪周脂肪MCP-1的mRNA表達(dá)；Western Blotting法檢測(cè)睪周脂肪組織MCP-1的蛋白表達(dá)。4.相關(guān)分析：分析MCP-1與游離脂肪酸、總膽固醇、甘油三脂、低密度脂蛋白膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、空腹血糖、空腹胰島素水平和HOMA

6、-IR指數(shù)等指標(biāo)之間的相關(guān)性，所有結(jié)果均采用SPSS11.0軟件分析處理。
　　 結(jié)果：1.各組大鼠體重比較：自20周齡開(kāi)始，O組、M組和T組間大鼠體重?zé)o明顯差別，但O組、M組和T組體重明顯高于NC組(P<0.01)。至34周齡始，T組體重較O組和M組有下降趨勢(shì)(P值分別為0.312和0.415)。
　　 2.糖脂代謝指標(biāo)比較：O組游離脂肪酸、總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、空腹血糖、空腹胰島素和HOMA-IR指數(shù)明顯高于

7、NC組(P值分別為0.001、0.043、0.000、0.000、0.023和0.000)；T組與O組比較，游離脂肪酸、總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、空腹血糖和HOMA-IR指數(shù)明顯降低(P值分別為0.005、0.036、0.000、0.036和0.029)，且T組的游離脂肪酸、總膽固醇、空腹胰島素及HOMA-IR指數(shù)明顯低于M組(P值分別為0.000、0.047、0.017和0.008)。
　　 3.各組間發(fā)病率比較：四組大鼠

8、間糖尿病發(fā)病率不同(x2=34.661，P=0.000)，且T組與O組比較有下降趨勢(shì)(P=0.085)。M組較T組發(fā)病率明顯升高(P=0.005)。
　　 4.各組間大鼠血清MCP-1水平比較：與NC組[(33.85±8.92)pg/ml]比較，O組大鼠血清MCP-1水平[(43.90±6.73)pg/ml]增高(P<0.05)；與O組大鼠循環(huán)MCP-1水平[(43.90±6.73)pg/ml]比較，T組[(34.64±7.60

9、)pg/ml]、M組[(34.74±6.35)pg/ml]降低(P<0.05)。
　　 5.睪周脂肪組織中MCP-1的mRNA表達(dá)：O組與NC組相比，MCP-1的mRNA表達(dá)增加(P=0.004)；T組和M組與O組比較，MCP-1的mRNA表達(dá)明顯減少(P=0.006，P=0.003)。
　　 6.睪周脂肪組織中MCP-1蛋白的表達(dá)：O組睪周脂肪組織MCP-1的蛋白表達(dá)與NC組相比有升高的趨勢(shì)(P=0.087)；M組與T

10、組睪周脂肪組織MCP-1的蛋白表達(dá)與O組比較有下降趨勢(shì)(P值分別為0.166和0.595)。
　　 7.直線相關(guān)分析：顯示血清MCP-1水平與游離脂肪酸及HOMA-IR指數(shù)呈正相關(guān)(r、P分別為0.387，0.018；0.609，0.000)。
　　 結(jié)論：1.經(jīng)過(guò)高脂飼養(yǎng)OLETF大鼠，成功建立了具有胰島素抵抗及空腹高血糖的T2DM動(dòng)物模型。高脂飼養(yǎng)使OLETF大鼠血清游離脂肪酸、總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、空腹血糖

11、、空腹胰島素及HOMA-IR指數(shù)明顯增高。
　　 2.經(jīng)過(guò)替米沙坦的干預(yù)，OLETF大鼠血清游離脂肪酸、總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、空腹血糖水平及HOMA-IR指數(shù)降低，表明替米沙坦可以改善高游離脂肪酸血癥、高膽固醇血癥及高低密度脂蛋白血癥，降低空腹血糖水平。
　　 3.高脂飲食喂養(yǎng)的大鼠血清MCP-1水平、睪周脂肪組織MCP-1的mRNA表達(dá)和蛋白表達(dá)增加。
　　 4.替米沙坦使血清MCP-1的水平下降，睪周