脂肪組織局部缺氧對MCP-1表達的影響及其機制研究.pdf

1、目的：本課題旨在體外和整體水平探討脂肪組織局部缺氧對MCP-1表達的影響及其可能的分子機制。
　　 方法：本課題分為細胞實驗和動物實驗兩部分。第一部分為細胞實驗，利用氯化鈷（CoCl2）誘導小鼠3T3-L1 成熟脂肪細胞低氧模型以及誘導前脂肪細胞低氧分化，實時定量聚合酶鏈反應法（Real-time PCR）、蛋白免疫印跡法（Western Blot）檢測低氧誘導因子（HIF-1α）的表達水平；Real-time PCR、酶聯(lián)免疫

2、吸附法（ELISA）測定單核細胞趨化因子（MCP-1）的表達水平，并分析HIF-1α與MCP-1 在蛋白水平上的相關性。第二部分為動物實驗，利用高脂高果糖飼料喂養(yǎng)ICR 小鼠12 周，建立伴肥胖的2 型糖尿?。═2DM）模型。每4 周測定空腹血糖（FBG）及體重； 12 周末進行腹腔注射葡萄糖耐量試驗（IPGTT）并測定血漿胰島素水平，血漿總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）、高密度脂蛋白（HDL-C）水平及血

3、漿尿酸（uric acid）水平。Western Blot和ELISA 分別檢測小鼠大網(wǎng)膜脂肪組織HIF-1α及MCP-1 蛋白水平。
　　 結果：（1）100μmol/L CoCl2 誘導成熟3T3-L1 脂肪細胞低氧，從而上調MCP-1 的分泌；（2）在常氧條件下，隨著3T3-L1 前脂肪細胞分化成熟，HIF-1α蛋白表達水平逐漸降低而培養(yǎng)液中MCP-1 蛋白水平逐漸升高；在100μmol/L CoCl2 誘導的低氧條件下，

4、HIF-1α蛋白表達水平及培養(yǎng)液中MCP-1 蛋白水平與分化前無顯著差異；（3）高脂高果糖組小鼠體重高于對照組小鼠體重的20％，且空腹血糖平均值高于7.8mmol/L，示伴肥胖的T2DM模型造模成功；（4）模型組小鼠大網(wǎng)膜脂肪組織HIF-1α及MCP-1 蛋白表達水平均高于對照組小鼠。
　　 結論：（1）3T3-L1 成熟脂肪細胞在低氧條件下升高MCP-1 分泌水平，提示脂肪細胞低氧可能是脂肪組織發(fā)生低度炎癥反應的重要機制之一；