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文檔簡介
1、目的:觀察色素上皮衍生因子(PEDF)對腎小球系膜細(xì)胞MCP-1、IL-6mRNA及蛋白表達(dá)的影響,并探討其可能的作用機(jī)制。
方法:以不同濃度葡萄糖(10、20、30mmol/L)及不同時間(12h、24h、48h)作用腎小球系膜細(xì)胞,聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)方法檢測MCP-1、IL-6mRNA表達(dá);加入不同濃度PEDF(10、40、160nmol/L)干預(yù),RT-PCR和酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)方法分別檢測MCP
2、-1、IL-6mRNA和蛋白表達(dá),觀察PEDF對上述炎癥因子表達(dá)的影響;細(xì)胞免疫熒光方法檢測NF-κBp65蛋白表達(dá)。
結(jié)果:(1)5.6mmol/L糖可使系膜細(xì)胞中有基礎(chǔ)量的MCP-1、IL-6mRNA的表達(dá),高糖作用后,二者的表達(dá)水平隨糖濃度升高而增高,20mmol/L濃度時達(dá)高峰(P<0.01)。當(dāng)糖濃度繼續(xù)增加至30mmol/L時,MCP-1mRNA表達(dá)不再隨糖濃度增加而增加,IL-6mRNA表達(dá)則出現(xiàn)下降(P<0.0
3、5)。在20mmol/L高糖作用12~48h范圍內(nèi),二者表達(dá)水平隨作用時間延長而增加,呈明顯的時效關(guān)系。(2)PEDF可下調(diào)MCP-1、IL-6mRNA及蛋白表達(dá),并且呈量效關(guān)系。當(dāng)濃度增加至160nmol/L時,PEDF幾乎完全阻斷了高糖對MCP-1、IL-6的誘導(dǎo)作用。(3)高糖作用下NF-κB熒光信號從胞漿轉(zhuǎn)移到胞核,PEDF阻斷了NF-κB信號的核轉(zhuǎn)位。
結(jié)論:(1)高糖可促使腎小球系膜細(xì)胞MCP-1、IL-6mRNA
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