替米沙坦對非酒精性脂肪性肝炎模型大鼠肝纖維化的影響.pdf

1、非酒精性脂肪性肝?。╪onalcoholic fatty liver disease，NAFLD）包括單純性脂肪性肝病、非酒精性脂肪性肝炎（nonalcoholic steatohepatitis，NASH）、脂肪性肝纖維化和脂肪性肝硬化。其中NASH是NAFLD進展的重要中間階段，也是隱源性肝硬化的重要病因。NAFLD是一種病變主要在肝小葉，以肝細胞脂肪變性和脂肪過多貯積為病理特征但無過量飲酒史的臨床綜合征。NAFLD最常見病因為肥胖

2、、2型糖尿病和高脂血癥。NAFLD的患病率逐年上升，已成為全球普遍關(guān)注的醫(yī)學問題和社會問題。
　　 NASH以竇周纖維化為特征，由活化的肝星狀細胞介導。血管緊張素-Ⅱ（AngiotensinⅡ，ATⅡ）已被報導在組織器官纖維化的發(fā)生機制上起重要的作用，并且研究了它在器官纖維化中的作用。一些研究已證實AT1受體阻制劑（ARB）可明顯改善實驗性肝纖維化通過抑制肝星狀細胞活化和肝臟TGF-β1的表達。最近，替米沙坦，一種新型的ARB，

3、被發(fā)現(xiàn)除了阻制AT1受體外，它還是PPARγ的部分激動劑，具有改善糖脂代謝，阻止體重增加，促進脂肪細胞分化的作用。故我們探討替米沙坦對NASH大鼠肝纖維化的影響，為NASH提供一種新的治療方法。
　　 目的：建立非酒精性脂肪性肝炎模型，觀察替米沙坦對NASH大鼠體重、血清轉(zhuǎn)氨酶、血脂、胰島素抵抗以及對肝臟病理、纖維化的影響。探討替米沙坦防治NASH的作用機制。
　　 方法：選取雄性（Sprague Dawley）SD大鼠

4、35只正常喂養(yǎng)1周后，隨機分成3組：正常對照組（NC group.n=10）喂飼普通飼料16周；高脂對照組（FC group，n=15），喂飼高脂飼料（88％普通飼料+2％膽固醇+10％豬油）；高脂加替米沙坦干預組（FT group，n=10），喂飼高脂飼料。12周末時隨機取FC組5只做肝組織的HE染色，確定造模成功。然后干預組給予替米沙坦干預（5mg/kg.d）并繼續(xù)高脂飲食，而正常及模型對照組則以等容量鹽水灌服，均每日一次，持續(xù)4周

5、。實驗動物自由飲水進食。16周后處死大鼠，電子天平稱取體重，肝濕重，計算肝指數(shù)：肝濕重/體重×100％；取肝右葉約1cm×1cm×0.5cm組織固定于4％多聚甲醛，常規(guī)石蠟切片，Masson染色明確有無纖維化，HE染色光鏡下觀察組織脂肪變程度及炎癥分級；測定血清甘油三酯（TG）、膽固醇（TC）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）。測空腹血糖（FBG），空腹血清胰島素（FINS），由

6、公式HOMA-IR=（FPG×FINS）/22.5計算胰島素抵抗指數(shù)。用免疫組織化學法測定各組肝組織中α-SMA的表達。用半定量的逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測各組大鼠肝臟TIMP-1、MMP-2和TGF-β1的mRNA表達水平。
　　 結(jié)果：
　　 1各組大鼠體重、肝濕重及肝指數(shù)的變化情況：16周末成功復制大鼠NASH模型。模型組大鼠的體重（609.56±37.29）、肝重（25.40±4.71）及肝指數(shù)（4

7、.29±0.49％）均明顯高于正常對照組的體重（516.29±37.77）、肝重（13.03±2.74）及肝指數(shù)（2.72±0.57％）（P值均<0.01），有顯著性差異。與模型組相比。治療組體重（558.15±46.12）、肝重（18.19±2.73）及肝指數(shù)（3.79±0.57％）均明顯降低（P<0.01，0.01，0.05），有統(tǒng)計學意義。
　　 2肝組織病理學：正常組大鼠肝細胞無脂肪變性，均無炎性細胞浸潤；模型組大鼠出現(xiàn)

8、彌漫性肝細胞脂肪變性，以中央靜脈周圍最為明顯，可見程度不等的小葉內(nèi)炎癥、匯管區(qū)炎癥，并有點灶狀壞死，甚至部分壞死融合成片，與正常組相比有顯著性差異（P值<0.01）。治療組肝細胞脂肪變性較模型組明顯改善（P<0.01）；治療組炎癥分級較模型組明顯降低（P<0.01）。造模組12周大鼠肝臟Masson染色未見肝組織纖維化，但造模組16周出現(xiàn)中央靜脈周圍、竇周纖維組織增生及纖維條索。治療組肝臟Masson染色未見纖維化，有顯著性差異（P<0

9、.01）。
　　 3血清生化指標：（1）血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）：模型組AIT（114.00±19.75）較正常組（48.20±10.99）顯著增高（P值<0.01），而治療組ALT為（78.80±15.64）較模型組顯著下降（P值<0.01），但與正常組仍有差異（P值<0.01）。模型組AST為（265.33±52.16）較正常組（153.00±45.06）顯著增高（P值<0.01），而治療組AST

10、為（211.83±65.51），較模型組下降，但無明顯差異（P>0.05）。（2）血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）和高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）：模型組血清 TC、 TG分別為（2.65±0.77，0.53±0.27）較正常組（1.44±0.24，0.29±0.14）顯著升高（P<0.01，0.05），治療組TC、TG分別為（2.22±0.55，0.39±0.18）較模型組下降（P>0.05），但無明顯差異；模型組HDL-C（

11、0.30±0.09）較正常組（0.46±0.05）顯著下降（P值<0.01）.，而治療組HDL-C（0.31±0.11），較模型組有所上升，但無明顯差異（P>0.05）。
　　 4胰島素抵抗變化及血糖情況：模型組空腹血糖、胰島素及胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）分別為（6.58±0.86，20.73±0.91，6.23±0.19）與正常對照組相比（4.58±1.00，10.48±1.46，2.13±0.29）明顯升高（P值均<0

12、.01），治療組空腹血糖、胰島素及胰島素抵抗指數(shù)分別為（5.38±0.88，15.02±1.22，3.59±0.29）較模型組明顯下降，有顯著性差異（P值均<0.01）。
　　 5免疫組織化學法：正常組大鼠肝臟中α-SMA僅于血管壁平滑肌細胞胞漿少量表達，而模型組大鼠肝臟α-SMA表達除在血管壁平滑肌細胞胞漿外，在肝組織中也見有陽性表達，與正常組比較，有顯著性差異（P<0.01）。治療組表達較模型組明顯減少（P<0.01），有統(tǒng)

13、計學意義。
　　 6 TIMP-1，MMP-2和TGF-β1 mRNA表達：（1）TIMP-1mRNA變化：與正常組mRNA0.32±0.03相比，模型組0.93±0.08顯著增加（P<0.01），治療組0.77±0.07明顯低于模型組（P值<0.05）。（2）MMP-2mRNA變化：正常組mRNA為0.47±0.05；與正常組相比，模型組0.88±0.09顯著增加（P<0.01）；治療組0.69±0.07較模型組明顯降低（P<

14、0.01）。（3）TGF-β1mRNA變化：與正常組mRNA0.12±0.01相比，模型組0.36±0.04顯著增加（P<0.01）；治療組0.26±0.03明顯低于模型組（P值<0.01）。
　　 結(jié)論：
　　 高脂飼料飲食16周可成功誘導大鼠NASH形成。替米沙坦能改善糖脂代謝及胰島素抵抗并降低體重，可減輕肝臟脂肪變性及抗肝纖維化作用。其分子機制可能與其激活PPARγ受體，抑制血管緊張素-Ⅱ1型受體有關(guān)。對NASH有