運用蛋白質(zhì)組學技術研究結腸組織、腺瘤與腺癌組織的差異表達蛋白.pdf

1、中山大學博士學位論文運用蛋白質(zhì)組學技術研究結腸組織、腺瘤與腺癌組織的差異表達蛋白姓名：崔冀申請學位級別：博士專業(yè)：外科學指導教師：汪建平20080520中山大學博士學位論文運用蛋白質(zhì)組學技術研究結腸組織、腺瘤與腺癌組織的差異表達蛋白我們先通過對手術時獲取的結腸癌組織標本進行預實驗。以不同實驗參數(shù)，即蛋白質(zhì)裂解液體積比、蛋白質(zhì)沉淀提取等方法提取結腸癌組織總蛋白質(zhì)，采用24cm、Ph4—7的IPG膠條進行第一向等電聚焦，125％的SDSPA

2、GE進行第二向電泳分離蛋白后，用分析軟件對圖譜進行分析，結果顯示在組織和蛋白質(zhì)裂解液的質(zhì)量體積比為l：10，用丙酮結合無水乙醇法清洗蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)上樣量100pg，得到的結腸癌總蛋白質(zhì)的雙向電泳圖像重復性好，顯示蛋白質(zhì)分離清晰，沒有明顯的條帶。在此基礎上，我們利用得到的優(yōu)化實驗條件，對正常結腸組織、結腸腺瘤、結腸腺癌提取總蛋白，并進行膠內(nèi)差異雙向電泳分離，電泳后的凝膠用CyDye進行染色，圖像掃描后應用分析軟件對電泳圖譜進行分析，建立正

3、常組織、腺瘤組織、腺癌組織的蛋白質(zhì)差異表達圖譜。我們發(fā)現(xiàn)兩兩間差異表達變化超過2倍的蛋白點有31個。在此基礎上，采用自動凝膠采樣系統(tǒng)對差異表達的蛋白點進行自動采集，應用特異性的胰酶消化蛋白質(zhì)，酶解后的肽段用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(MALDI—TOF—MS)進行分析，對獲得的原始數(shù)據(jù)通過SEQUEST軟件搜索SwISSPROT的人非冗余蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫，在31個差異表達的蛋白點中，鑒定了24個蛋白質(zhì)，其中Be協(xié)Tropomyos

4、in(TMp)首次發(fā)現(xiàn)在結直腸腺癌組織表達明顯下降。從功能分析，這些差異蛋白質(zhì)與癌細胞的發(fā)生、增殖、分化、轉移等相關。為了保證初篩結果的可信、進一步研究差異表達蛋白質(zhì)的表達趨勢，并探討差異表達蛋白BetaTropomyosin(TMp)、Transglin(SM22)在結腸癌的表達情況及在疾病發(fā)展中的作用，我們運用蛋白質(zhì)免疫印跡方法(Westem—Blot)檢測它們在正常組織、腺瘤、腺癌中的相對含量。結果發(fā)現(xiàn)，與正常結腸組織相比，腺瘤組