蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)比較腦出血后6小時與72小時病灶周邊腦組織的差異表達蛋白.pdf

1、目的:腦出血(intracerebral hemorrhage,ICH)是指腦動脈、靜脈或毛細血管破裂導(dǎo)致腦實質(zhì)內(nèi)的出血。腦出血占急性腦血管病的20％～30％,致殘率及死亡率較高,嚴重危害人民身體健康,國內(nèi)外對此病均高度重視。腦出血后,通常在6h開始出現(xiàn)出血灶周邊腦組織水腫,72小時左右達高峰,半個月后逐漸消退。腦水腫加重腦組織損傷,控制腦水腫和顱內(nèi)高壓是降低病死率和病殘率的關(guān)鍵。如果能清楚地知道腦出血后6小時與72小時病灶周邊腦組織差

2、異表達蛋白,則對從分子角度理解腦出血及出血后水腫的病理機制和研發(fā)新的臨床治療藥物有重要意義。
　　 新近出現(xiàn)的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)是生命科學(xué)進入后基因組時代的標志之一。蛋白質(zhì)組學(xué)(Proteomics)是指根據(jù)蛋白質(zhì)種類、數(shù)量以及時間、空間上的變化來研究表達于細胞、組織及個體中的全部蛋白質(zhì)(proteome),并從其結(jié)構(gòu)和功能的角度綜合分析生命活動的一門科學(xué)。蛋白質(zhì)組學(xué)可以比較兩種或更多的樣品之間的蛋白質(zhì)水平,是揭示疾病分子機制,發(fā)現(xiàn)

3、疾病標志蛋白,尋找新的藥物靶標的理想工具。
　　 本研究利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)對腦出血動物模型血腫周圍的腦組織進行動態(tài)研究,比較出血后6小時與72小時的腦組織差異表達蛋白,旨在深入理解腦出血及出血后水腫的分子機制,并為尋找更為有效的治療方法提供實驗依據(jù)。
　　 方法:利用立體定向儀制作大鼠尾狀核腦出血動物模型,在6小時、72小時的時間點取病灶周圍的腦組織為樣本,提取腦組織蛋白,進行雙向凝膠電泳:以固相PH梯度等電聚焦為第一向

4、,十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)為第二向進行雙向電泳(2-DE),凝膠固定后以考馬斯亮蘭R250染色,圖像分析軟件ImageMaster2D Elite分析電泳圖譜,得到差異表達蛋白質(zhì)點;然后對差異表達蛋白進行膠內(nèi)酶解,所得肽段用基質(zhì)輔助激光解析/電離.飛行時間(MALDI-TOF)質(zhì)譜儀檢測,得到的肽片段質(zhì)量指紋圖譜檢索蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫,鑒定出差異表達蛋白。
　　 結(jié)果:41種蛋白質(zhì)的表達量在腦出血后72小

5、時組與6小時組有顯著不同,其中19種蛋白質(zhì)在腦出血后72小時組的腦組織中表達量上調(diào),經(jīng)鑒定這些蛋白質(zhì)為丙酮酸脫氫酶-2,空泡型質(zhì)子泵-B2,神經(jīng)膠質(zhì)原纖維酸性蛋白質(zhì),肌動蛋白相關(guān)蛋白-3,胞質(zhì)氨肽酶,磷酸甘油酸激酶-1(PGK-1),延長因子Tu,細胞分裂相關(guān)蛋白1,嘌呤核苷酸化酶(PNPase),抑制素,膜聯(lián)蛋白A5,14-3-3蛋白-ε,F肌動蛋白加帽蛋白α-2,β-突觸核蛋白,L-異天冬氨酸蛋白質(zhì)鄰甲基轉(zhuǎn)移酶(PIMT),腺苷酸激

6、酶同工酶-1,丙酮酸激酶同工酶M1/M2,胞外信號調(diào)節(jié)激酶-2,T-復(fù)合物蛋白1-ε;21種蛋白在腦出血后72小時組的表達量下調(diào),經(jīng)鑒定為移行性內(nèi)質(zhì)網(wǎng)ATP酶,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)素,肌動蛋白聚合蛋白,二氯硫辛酸脫氫酶,吡哆醛激酶,電壓依從性陰離子選擇性通道蛋白1,碳酸酐酶2,磷酸甘油酸酯變位酶,谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶Yb-3,神經(jīng)元蛋白22,腺苷高半胱氨酸酶,促分裂原活化蛋白激酶激酶1(MAPKK1),二氫嘧啶酶相關(guān)蛋白5(DRP-5),空泡型質(zhì)子泵-