胃腺癌組織差異表達(dá)蛋白質(zhì)的分離與鑒定.pdf

1、近年來(lái),高通量的基因組學(xué)技術(shù)使我們對(duì)腫瘤相關(guān)的基因有了深入的了解。但是,這并不足以使我們能夠在分子水平對(duì)腫瘤發(fā)生的機(jī)制進(jìn)行深入的剖析,基因組學(xué)技術(shù)無(wú)法對(duì)腫瘤蛋白水平、轉(zhuǎn)錄/轉(zhuǎn)錄后修飾以及蛋白—蛋白相互作用進(jìn)行監(jiān)測(cè)[1]。因此,有必要利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)對(duì)腫瘤相關(guān)的蛋白進(jìn)行細(xì)致的研究。作為蛋白質(zhì)組學(xué)的核心技術(shù)之一的雙向凝膠電泳(2-DE)是1975年由0’Farrell等[2]首先發(fā)明的,其基本原理是利用蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)和分子量的不同而將它們

2、相互分離。利用2-DE對(duì)腫瘤與正常組織差異表達(dá)蛋白質(zhì)進(jìn)行分離和鑒定,有助于尋找腫瘤的特異分子標(biāo)志物,可作為一種潛在的診斷工具。
　　胃癌是一種常見(jiàn)的惡性腫瘤,其死亡率在所有惡性腫瘤中排第二位,世界上每年大約有75萬(wàn)人死于胃癌[3]。造成胃癌死亡率高的原因主要是其早期診斷率非常低,只有不到一半的患者能夠在早期胃癌時(shí)被診斷。據(jù)AJCC的調(diào)查,IV期胃癌患者的5年生存率只有7％到10.1%,而早期胃癌(IA期)患者的5年生存率可達(dá)78%

3、到93.3%[4,5]。因此,提高早期診斷率對(duì)改善胃癌患者的預(yù)后十分關(guān)鍵。利用蛋白質(zhì)組學(xué)的技術(shù)對(duì)臨床的腫瘤標(biāo)本進(jìn)行研究,可以發(fā)現(xiàn)腫瘤相關(guān)的分子標(biāo)志物。這類標(biāo)志物既可以作為研發(fā)新的早期診斷方法的基礎(chǔ),也可以為了解腫瘤發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制提供線索。
　　胃腺癌是胃惡性腫瘤中最常見(jiàn)的病理類型,大約占其90%以上。我們希望通過(guò)對(duì)胃腺癌及正常胃組織雙向電泳的技術(shù)進(jìn)行優(yōu)化,提高對(duì)堿性區(qū)域和低豐度蛋白的分離、檢測(cè),改善胃腺癌及正常胃組織蛋白質(zhì)圖

4、譜的分辨率。在本研究的第一部分中,我們利用4個(gè)pH范圍梯度重疊的IPG膠條對(duì)臨床獲取的胃腺癌及正常胃組織進(jìn)行2-DE,分別獲得了各自的總蛋白圖譜。通過(guò)分析胃腺癌及其配對(duì)正常胃組織的2DE圖譜,共找出115個(gè)差異表達(dá)蛋白點(diǎn)。在研究的第二部分中,通過(guò)對(duì)著115個(gè)差異蛋白點(diǎn)分別經(jīng)MALDI-TOF-MS質(zhì)譜鑒定和數(shù)據(jù)庫(kù)檢索,共鑒定出70種差異表達(dá)的蛋白質(zhì)。其中包括鈣結(jié)合蛋白、波形蛋白、過(guò)氧化物歧化酶、α-烯醇酶、鈣調(diào)理蛋白等27種在胃腺癌組織