術(shù)后慢性疼痛大鼠脊髓背角組織的差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的:
　　 建立大鼠開胸術(shù)后慢性疼痛模型。利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)對經(jīng)由手術(shù)側(cè)脊髓背角組織提取的蛋白進(jìn)行比較篩選，鑒定出表達(dá)存在差異的蛋白質(zhì)，最后采用Western免疫印跡法進(jìn)一步驗(yàn)證部分手術(shù)后慢性疼痛(chronicpost-surgicalpain，CPSP)相關(guān)蛋白的表達(dá)情況。
　　 方法:
　　 1．建立大鼠開胸術(shù)后慢性疼痛模型，采用更精確的行為學(xué)試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。
　　 SPF級雄性SD大鼠，體重250

2、g～350g，隨機(jī)分為3組(n=12)：空白組、假手術(shù)組和模型組。麻醉后行氣管內(nèi)插管機(jī)械通氣，于右胸第四五肋間做一小切口，用顯微牽開器將兩肋骨撐開8mm并持續(xù)1小時(shí)，建立開胸手術(shù)模型。假手術(shù)組除不進(jìn)行牽引外，其余操作同模型組。于術(shù)前1天、術(shù)后每天共40天測量體重及大鼠對機(jī)械刺激和冷丙酮刺激的反應(yīng)。
　　 2．脊髓背角組織的差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究
　　 建立大鼠開胸術(shù)后慢性疼痛模型。建模成功后將動(dòng)物分為2組，即手術(shù)后慢性疼痛組

3、(CPSP組)以及無手術(shù)后慢性疼痛組（non-CPSP組）。分別提取兩組大鼠脊髓背角組織中的總蛋白。利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)對提取的蛋白質(zhì)進(jìn)行比較篩選，鑒定與CPSP發(fā)生相關(guān)的蛋白質(zhì)，并采用western免疫印跡法進(jìn)一步驗(yàn)證部分CPSP相關(guān)脊髓背角蛋白的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:
　　 1．大鼠開胸術(shù)后慢性疼痛模型：與術(shù)前基礎(chǔ)值比較，行開胸手術(shù)并肋骨牽開的12只大鼠中有5只在術(shù)后出現(xiàn)了明顯的機(jī)械和冷刺激的異常性疼痛(P＜0.05

4、)且疼痛持久；手術(shù)后慢性疼痛發(fā)生率為41.7％，與文獻(xiàn)報(bào)告類似，提示建模成功。
　　 2．差異蛋白質(zhì)譜分析：經(jīng)鑒定得到的58個(gè)差異蛋白質(zhì)根據(jù)功能可分為5類：1．細(xì)胞骨架蛋白：微管蛋白（Tubulinalpha-1Achain，Tubulinbeta-2Cchain，Tubulinbeta-3chain,Tubulinbeta-2Achain,Microtubule-associatedprotein)、原肌球蛋白（Isoform

5、1ofTropomyosinalpha-3chain）、B-肌動(dòng)蛋白(ActbActin，cytoplasmic1)、肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白3(Actin-relatedprotein3)、橋粒聯(lián)結(jié)蛋白(Ahnak2)、突觸小體相關(guān)蛋白(Snap91);2．能量產(chǎn)生／轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)：甲基丙二酸半醛脫氫酶(Methylmalonate-semialdehydedehydrogenase)、鈉／鉀轉(zhuǎn)運(yùn)ATP酶亞基alpha-3(Sodium/potas

6、sium-transportingATPasesubunitalpha-3)、磷酸甘油酸酯變位酶1（PgamlPhosphoglyceratemutase1）、過氧化氫酶(Catalase)、NADP依賴性蘋果酸酶(NADP-dependentmalicenzym)、脂肪酸結(jié)合蛋白(Fattyacid-bindingprotein，epidermal)、丙酮酸激酶同工酶M1/M2(PyruvatekinaseisozymesM1/M2)

7、、?；o酶A合成酶長鏈家族成員6(Long-chain-fatty-acid-CoAligase6)、4-氨基丁酸氨基轉(zhuǎn)移酶(4-aminobutyrateaminotransferase)、ATP合酶(ATPsynthasegammachain)、核苷二磷酸激酶B(NucleosidediphosphatekinaseB)和神經(jīng)元特異性烯醇化酶（Gamma-enolase）；3．信號(hào)傳遞分子：鳥嘌呤核苷酸結(jié)合蛋白α-2亞基(Isofo

8、rmAlpha-2ofGuaninenucleotide-bindingproteinG(o)subunitalpha)、ras相關(guān)蛋白R(shí)ap-1b（Ras-relatedproteinRap-1b）、多能蛋白聚糖核心蛋白亞型3(versicancoreproteinisoform3)和轉(zhuǎn)化蛋白(TransformingproteinRhoA);4．運(yùn)輸?shù)鞍祝貉彖F傳遞蛋白亞型1（血清鐵傳遞蛋白亞型1）；5．其他：髓鞘堿性蛋白亞型1(I

9、soform1ofMyelinbasicproteinS)、髓鞘相關(guān)糖蛋白(Myelin-associatedglycoprotein)、發(fā)動(dòng)蛋白-1（2型）（Isoform2ofDynamin-1）和WDR1蛋白(WDrepeat-containingprotein1)等。
　　 3．Western驗(yàn)證結(jié)果：與蛋白質(zhì)組學(xué)分析和鑒定基本一致，谷氨酰胺酶呈免疫陽性且CPSP組的谷氨酰胺酶含量高于non-CPSP組(P＜0.05)。