大豆種子蛋白的差異蛋白質(zhì)組研究.pdf

1、蛋白質(zhì)組是一個基因組表達(dá)的所有蛋白質(zhì)，具體指一個細(xì)胞或一個組織的基因組表達(dá)的全部蛋白質(zhì)。大豆種子富含蛋白質(zhì)，平均40％。但目前對這些蛋白的表達(dá)、調(diào)控以及進(jìn)化的分子機(jī)理仍然不清楚。因此，本研究利用蛋白質(zhì)組學(xué)方法研究了野生大豆和栽培大豆種子差異蛋白以及栽培大豆不同發(fā)育時期種子蛋白的差異，初步結(jié)果如下。
　　 應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)方法比較3個野生大豆（Glycine soja）和3個栽培大豆（Glycine max）的種子貯藏蛋白差異。結(jié)果

2、發(fā)現(xiàn)，在考馬斯亮藍(lán)染色的雙向電泳pH4-7的膠上，經(jīng)過PDQuest圖像分析軟件平均可檢測到550個左右的蛋白點(diǎn)。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，表達(dá)量變化2.5倍以上的點(diǎn)有10個，其中大部分蛋白僅在栽培大豆中檢測到。對這10個蛋白點(diǎn)進(jìn)行了膠內(nèi)酶解，用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜測定均得到了肽質(zhì)量指紋圖譜。搜索大豆UniGene庫和NCBI庫共鑒定出5個蛋白質(zhì)，主要是與大豆抗性、抗?fàn)I養(yǎng)以及種子萌發(fā)相關(guān)的蛋白，包括大豆血凝素，種子成熟蛋白PM24，糖

3、結(jié)合蛋白，胰蛋白酶抑制劑p20以及成熟多肽。
　　 采用相同的辦法研究了大豆（Glycine max）N2899種子發(fā)育過程中蛋白質(zhì)的表達(dá)差異。在考染的pH4-7的雙向膠上分別檢測到不同發(fā)育期（15、20、30、40、50DAF和成熟的干種子）503、486、479、431、322和358個蛋白點(diǎn)。選取18個蛋白差異點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜鑒定，搜索大豆UniGene庫和NCBI庫共鑒定出了11個蛋白質(zhì)，結(jié)果表明：在胚胎發(fā)育早期，主要是與種子

4、萌發(fā)以及細(xì)胞生長分裂相關(guān)的蛋白（SBP，SBP2，核苷二磷酸激酶，Ⅱ氧化還原酶，烯醇酶，肌動蛋白解聚因子3）積累；在胚胎發(fā)育中后期，大豆貯藏蛋白（大豆球蛋白A3B4亞基，伴大豆球蛋白的β亞基）大量積累，其中PM31是一類小分子的熱激蛋白，在種子的成熟中起著重要的作用。還有一個目前功能不清楚的TS2脫氫酶/還原酶也在中期積累。
　　 最后，進(jìn)一步對轉(zhuǎn)gagal基因大豆T6和T7代種子進(jìn)行SDS-PAGE鑒定，結(jié)果表明轉(zhuǎn)基因T6和T