孤兒核受體Nur77在低剪切應(yīng)力誘導(dǎo)的小鼠頸動(dòng)脈血管重構(gòu)中的作用及機(jī)制.pdf

1、目的：
　　探討在低剪切應(yīng)力誘導(dǎo)小鼠頸動(dòng)脈血管重構(gòu)過程中，孤兒核受體Nur77的表達(dá)變化及其對(duì)血管重構(gòu)的影響和作用機(jī)制。
　　方法：
　　1）6-8周齡雄性C57BL/6小鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組和血管重構(gòu)模型組，部分結(jié)扎左側(cè)頸總動(dòng)脈分支方法構(gòu)建低剪切應(yīng)力誘導(dǎo)血管重構(gòu)模型。術(shù)后4周取材，蘇木素-伊紅（HE）染色分析頸總動(dòng)脈內(nèi)中膜面積及厚度，Verhoeff-Van Gieson彈性纖維染色標(biāo)記血管彈力板，天狼猩紅染色標(biāo)記膠原

2、，免疫熒光染色標(biāo)記Nur77，DHE探針檢測(cè)血管局部ROS水平。
　　2）原代培養(yǎng)大鼠血管平滑肌細(xì)胞，給予ox-LDL、7-KC、9-HODE、13-HODE、H2O2及其抑制劑N-乙酰半胱氨酸（NAC）刺激，western blotting和real time PCR方法檢測(cè)Nur77表達(dá)。
　　3）6-8周雄性Nur77-/-小鼠和C57BL/6小鼠造膜4周后取材，如方法1）檢測(cè)血管重構(gòu)相關(guān)指標(biāo)，同時(shí)免疫熒光染色方法檢測(cè)

3、MMP9和PCNA表達(dá)，原位末端標(biāo)記（TUNEL）法檢測(cè)血管細(xì)胞凋亡水平。
　　結(jié)果：
　　1）模型組小鼠左頸動(dòng)脈內(nèi)中膜面積及厚度較假手術(shù)組顯著增加（p＜0.05），彈力板多處斷裂，排列紊亂，局部ROS水平升高（p＜0.05）伴Nur77蛋白表達(dá)顯著增加（p＜0.05），上調(diào)的Nur77蛋白主要分布在血管平滑肌細(xì)胞（VSMC）中；
　　2）體外給予ox-LDL、7-KC、9-HODE、13-HODE、H2O2等氧化應(yīng)激

4、刺激后，大鼠VSMCNur77的mRNA及蛋白水平顯著增高，H2O2抑制劑NAC能夠逆轉(zhuǎn)上述效應(yīng)；
　　3）造模4w后，Nur77-/-小鼠組左頸動(dòng)脈內(nèi)中膜面積及厚度較顯著高于C57BL/6小鼠組（p＜0.05），彈力板斷裂增多，排列紊亂，局部MMP9、PCNA高表達(dá)（p＜0.05），但兩組血管細(xì)胞凋亡水平無差別（p>0.05）。
　　結(jié)論：
　　孤兒核受體Nur77在低剪切力誘導(dǎo)小鼠頸動(dòng)脈血管重構(gòu)過程中表達(dá)上調(diào)，上調(diào)