低切應(yīng)力誘導(dǎo)血管細(xì)胞活化激酶C受體1表達(dá)及其在細(xì)胞增殖中的作用.pdf

1、血管重建（remodeling）是高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化等心血管疾病共同的發(fā)病基礎(chǔ)和基本的病理過(guò)程。低切應(yīng)力（low shear stress，LowSS）與動(dòng)脈粥樣硬化血管重建的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)，但其力學(xué)生物學(xué)機(jī)制尚未得到徹底闡明。
　　在本實(shí)驗(yàn)室的前期工作中，應(yīng)用差異蛋白質(zhì)組學(xué)方法，對(duì)正常切應(yīng)力（normal shear stress,NSS,15 dyn/cm2）和低切應(yīng)力（5 dyn/cm2）條件下體外培養(yǎng)的大鼠胸主動(dòng)脈蛋

2、白質(zhì)表達(dá)圖譜進(jìn)行對(duì)比分析,篩選并鑒定出43個(gè)差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，其中活化激酶C受體1（receptor for activated C kinase1,RACK1）在低切應(yīng)力作用下的血管組織中呈高表達(dá)。
　　在此基礎(chǔ)上，本文在細(xì)胞水平對(duì)RACK1的表達(dá)進(jìn)行驗(yàn)證，并探討它在血管內(nèi)皮細(xì)胞（endothelial cells, ECs）和血管平滑肌細(xì)胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）增殖中的作用。應(yīng)

3、用平行平板流動(dòng)腔系統(tǒng)，對(duì)聯(lián)合培養(yǎng)的大鼠ECs和VSMCs分別施加正常切應(yīng)力和低切應(yīng)力，加載時(shí)間分別為12和24 h；然后，采用Western blotting技術(shù)檢測(cè) ECs和VSMCs的RACK1表達(dá)變化。在靜態(tài)條件下，應(yīng)用RNA干擾技術(shù)抑制 ECs和VSMCs的RACK1表達(dá)后，用ELISA方法檢測(cè)細(xì)胞的增殖，Western blotting技術(shù)檢測(cè)RACK1和磷酸化Akt的表達(dá)，以研究RACK1的表達(dá)對(duì)ECs和VSMCs增殖的影響

4、及其作用機(jī)制。
　　結(jié)果顯示：①與正常切應(yīng)力相比，低切應(yīng)力誘導(dǎo)了聯(lián)合培養(yǎng)ECs和VSMCs的RACK1表達(dá)，且低切應(yīng)力誘導(dǎo)ECs的RACK1表達(dá)在先，誘導(dǎo)VSMCs的RACK1表達(dá)在后；②抑制ECs和VSMCs的RACK1表達(dá)引起細(xì)胞的增殖下調(diào)；③抑制ECs和VSMCs的RACK1表達(dá)上調(diào)了Akt的磷酸化水平。
　　上述結(jié)果表明，低切應(yīng)力可誘導(dǎo)ECs和VSMCs的RACK1表達(dá)，且RACK1的表達(dá)變化與細(xì)胞增殖相關(guān)，提示RA