核受體Nur77調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子TGF-β信號(hào)活性的探究.pdf

1、孤兒核受體Nur77是核受體(Nuclear Receptors，NRs)超家族中非常重要的一員。它作為細(xì)胞內(nèi)立早基因的產(chǎn)物，能夠響應(yīng)包括各類生長(zhǎng)因子在內(nèi)的多種刺激。同時(shí)，Nur77廣泛參與到機(jī)體的生理以及病理學(xué)過(guò)程中，如:糖脂代謝，細(xì)胞自噬，炎癥發(fā)生發(fā)展以及腫瘤的生長(zhǎng)凋亡等過(guò)程。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（TransformingGrowth Factorβ，TGF-β）信號(hào)通路在體內(nèi)廣泛參與包括糖代謝，脂質(zhì)代謝，胞外基質(zhì)的更替，細(xì)胞的增殖、分化，

2、組織的纖維化以及腫瘤的發(fā)生發(fā)展等多種生理以及病理過(guò)程的調(diào)控。對(duì)TGF-β信號(hào)通路調(diào)控的研究一直是TGF-β研究的重點(diǎn)，但是核受體對(duì)TGF-β信號(hào)調(diào)節(jié)的活性和機(jī)理尚不清楚。
　　本課題在探究核受體與TGF-β之間相互關(guān)系的過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)了Nur77能夠作為一種新的調(diào)控蛋白對(duì)TGF-β信號(hào)通路進(jìn)行調(diào)控，并揭示了其中的調(diào)控機(jī)制。我們首先通過(guò)報(bào)告基因發(fā)現(xiàn)并證明了Nur77能夠在HepG2細(xì)胞中激活TGF-β/Smad3信號(hào)通路。研究發(fā)現(xiàn)，在

3、所用檢測(cè)的核受體中，只有Nur77能夠顯著激活響應(yīng)TGF-β/Smad3的報(bào)告基因CAGA-luc。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)Nur77不僅能夠上調(diào)本底CAGA-luc的報(bào)告基因活性，還能對(duì)TGF-β信號(hào)帶來(lái)的激活有上調(diào)作用。同時(shí)，Nur77帶來(lái)的這種激活效應(yīng)能夠被TGF-β一型受體抑制劑SB431542部分抑制。
　　我們進(jìn)一步探究Nur77上調(diào)TGF-β/Smad3活性的生物學(xué)機(jī)制。我們通過(guò)免疫共沉淀的方法發(fā)現(xiàn)，Nur77能夠和Smad3有相

4、互作用，其相互作用的結(jié)構(gòu)域?yàn)镹ur77的AB區(qū)域和Smad3的MH2結(jié)構(gòu)域。通過(guò)染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)揭示Nur77能夠通過(guò)結(jié)合Smad3間接結(jié)合Smad3的響應(yīng)原件。因此Nur77通過(guò)其自身的轉(zhuǎn)錄自激活活性，并通過(guò)與Smad3結(jié)合，進(jìn)而激活Smad3靶基因的轉(zhuǎn)錄。另外我們發(fā)現(xiàn)Nur77可能還通過(guò)其他的方式激活Smad3信號(hào)。Nur77能夠延長(zhǎng)Smad3的磷酸化和細(xì)胞核內(nèi)滯留時(shí)間，進(jìn)而延長(zhǎng)Smad3的激活時(shí)間;另外，Nur77與Smad3

5、之間的相互作用能夠破壞Smad3與Smad6之間的相互作用，進(jìn)而降低了Smad6對(duì)Smad3激活的抑制作用。通過(guò)RT-PCR和免疫印跡實(shí)驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)Nur77能夠上調(diào)TGF-β所誘導(dǎo)的PAI-1等Smad3靶基兇的表達(dá)。
　　因此，本研究發(fā)現(xiàn)了一種TGF-β信號(hào)通路的新的調(diào)節(jié)蛋白-孤兒核受體Nur77，并揭示了Nur77調(diào)節(jié)TGF-β/Smad3信號(hào)通路新的作用機(jī)制。本研究為治療TGF-β信號(hào)通路紊亂所導(dǎo)致的疾病提供了一種潛在的治