核受體RXRα-Nur77的表達及亞細胞定位對神經元凋亡的影響.pdf

1、目的：探討外源Aβ，及大腦病理性增加Aβ（AD模擬）對核受體RXRα、Nur77的表達和亞細胞定位的影響，RXRα、Nur77表達和亞細胞定位對神經元凋亡的影響。
　　方法：以用Aβ25-35和ddH2O分別處理的N2a細胞，AD小鼠與對照小鼠的大腦皮層和海馬為研究對象。PCR結合免疫組化方法鑒定AD小鼠是否模擬成功。首先，在基因水平上應用實時熒光RT-PCR方法檢測N2a細胞和皮層、海馬中RXRα、N ur77的mRNA表達水平

2、。第二，在蛋白含量水平上應用核質分離結合蛋白印記方法檢測RXRα、N ur77蛋白總含量以及在細胞核與細胞質中的含量。第三，在蛋白定位上應用免疫熒光對細胞爬片和大腦冰凍組織切片進行定位染色，觀察N2a細胞與皮層、海馬細胞中RXRα、N ur77的亞細胞定位；最后，細胞凋亡的檢測，流式細胞儀檢測N2a細胞凋亡情況，DAPI染色觀察皮層、海馬細胞的凋亡。
　　結果：N2a細胞經Aβ處理24h后，RXRαmRNA表達水平增加了16.47

3、％，Nur77mRNA表達水平無明顯變化；RXRα、Nur77總蛋白量變化無明顯差異，但RXRα、Nur77在細胞質中的含量與分布增多，RXRα與Nur77分別Control組的2.99%、3.91%增至Aβ25-35處理組的21.4%、24.2%，細胞凋亡率從Control組1.23%增至Aβ25-35處理組4.58%。與對照小鼠比較，AD小鼠中RXRα、Nur77mRNA表達水平在大腦皮層無明顯差異，但在海馬中分別增加了8.67%、