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文檔簡介
1、目的:探討TGF-β1對kruppel樣因子15(KLF15)表達的影響及其調(diào)控機制
方法:培養(yǎng)大鼠間質(zhì)成纖維細胞(NRK-49F),給予TGF-β1刺激及KLF15質(zhì)粒轉(zhuǎn)染NRK-49F過表達觀察KLF15和細胞外基質(zhì)(ECM)變化,通過Real-time PCR檢測KLF15mRNA和FNmRNA、CTGFmRNA、COLⅢmRNA變化,并通過WesternBlot檢測KLF15和CTGF蛋白表達變化,通過ELSA檢測
2、細胞培養(yǎng)上清液FN蛋白和Ⅲ型膠原變化。絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)細胞信號轉(zhuǎn)導通路特異性斷劑預處理NRK-49F后給予TGF-β1干預,觀察FNmRNA、CTGFmRNA、COLⅢmRNA、KLF15mRNA和KLF15蛋白及相關(guān)蛋白的磷酸化水平變化。
結(jié)果:TGF-β1干預大鼠腎臟成纖維細胞(NRK-49F)后促進細胞外基質(zhì)的分泌,抑制KLF15的表達。NRK-49F過表達KLF15后細胞外基質(zhì)表達明顯降低,ERK/M
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