足月新生兒呼吸窘迫綜合征肺表面活性物質(zhì)蛋白B遺傳缺陷探索性研究.pdf

1、目的：評估足月新生兒呼吸窘迫綜合征肺表面活性物質(zhì)蛋白B(SP-B)遺傳缺陷的發(fā)生頻率及突變類型,探討足月新生兒呼吸窘迫綜合征發(fā)病的遺傳機制,為進一步基因治療新生兒RDS提供科學實驗依據(jù)。
　　方法：選擇無血緣關(guān)系的漢族足月新生兒RDS20例作為RDS組,漢族20例其它病例作為對照組,并在年齡、體重、性別、孕母年齡、分娩方式等方面與RDS組無統(tǒng)計學差異。采用ELISA技術(shù)檢測支氣管肺泡灌洗液的SP-B蛋白含量,免疫組化技術(shù)檢測SP-

2、B蛋白在肺組織的表達;常規(guī)DNA抽提技術(shù)提取人全血DNA,PCR及基因測序技術(shù)分析SP-Bexon4的基因突變。
　　結(jié)果：RDS組患兒BAL SP-B含量在發(fā)病第1天(20.0±8.05ng/ml)、發(fā)病第3天(21.1±8.13ng/ml)、發(fā)病第7天(20.1±7.88ng/ml)、死后30min內(nèi)(19.4±8.02ng/ml)均顯著低于對照組(92.8±32.21;102.4±28.76;105.6±30.41;92.0

3、±32.71ng/ml)(P<0.001)。RDS組患兒肺組織SP-B蛋白表達陽性細胞數(shù)(18.5±10.7)顯著低于對照組(94.9±31.8)(t=10.191,P<0.001)。RDS組BAL SP-B蛋白含量表達水平越低及肺組織SP-B蛋白表達陽性細胞越少,則RDS胸部X線顯示嚴重性的級別越高,即二者具有很好的依從性。兩組均存在SP-B蛋白缺陷,RDS組(7例)高于對照組(1例)。exon4存在基因點突變,存在C/T、C/C、T

4、/T3種基因型。exon4基因突變中,RDS組占7例,其中,6例為純合C/C突變,1例為雜合C/T突變;對照組中占1例,其中,1例為雜合C/T突變,無純合C/C突變。8對父母中的一方也存在同樣的基因型。根據(jù)患者和父母的exon4基因結(jié)構(gòu)綜合分析,最后RDS組7例、對照組1例確定為SP-B基因遺傳缺陷?；蚨ㄎ辉赟P-B基因的1580位點,其正常的氨基酸密碼子為ACT,突變后密碼子為ATT或A(C/T)T,對應的氨基酸位置為131,突變后

5、引起氨基酸的改變,由原來的蘇氨酸變成了異亮氨酸(Thr131Ile)。RDS組基因突變發(fā)生頻率為0.35(7/20),對照組基因突變發(fā)生頻率0.05(1/20),RDS組基因突變發(fā)生頻率較對照組增高,差異比較有統(tǒng)計學意義(c2=3.906,P=0.048)。RDS組7例中,6例為C/C純合突變,其發(fā)生頻率為0.3(6/20),1例為C/T雜合突變,發(fā)生頻率為0.05(1/20);對照組1例為C/T雜合突變,其發(fā)生頻率為0.05(1/20

6、),無純合突變。RDS組純合突變發(fā)生頻率(0.3)高于對照組(0),差異比較有統(tǒng)計學意義(c2=4.902,P=0.027),提示exon41580位置基因的純合突變與研究范圍的北京市漢族NRDS發(fā)病相關(guān)聯(lián);而兩組雜合突變頻率相同,提示exon41580位置基因的雜合突變與研究范圍的北京市漢族NRDS發(fā)病無關(guān)。
　　結(jié)論：(1)BAL SP-B蛋白缺陷參與漢族足月NRDS發(fā)病。
　　(2)肺部SP-B表達減少參與漢族足月NR