蛋白酶活化受體2在胰腺癌痛發(fā)生機制中的作用研究.pdf

1、目的： 癌性疼痛為癌癥患者最常見和最難忍受的癥狀之一,常比癌癥死亡更令人畏懼,嚴(yán)重影響生存質(zhì)量,甚至導(dǎo)致患者拒絕治療或自殺。胰腺癌疼痛亦是如此。晚期胰腺癌痛相當(dāng)劇烈,不僅因為軀體方面的疼痛,造成極其難忍的生理上的痛苦,而且常伴有強烈的植物神經(jīng)系統(tǒng)和心理學(xué)異常,而帶來社會及精神方面的痛苦。因此,癌痛控制已成為患者的第一需要和構(gòu)成胰腺癌姑息治療不可缺少的重要組成部分。對于胰腺癌痛理想的治療對策應(yīng)是針對疼痛機制的治療,但其疼痛產(chǎn)生的機

2、制目前不是十分清楚。 而蛋白酶活化受體(Protease activated receptors,PARs)屬于G蛋白偶聯(lián)受體家族成員,目前發(fā)現(xiàn)的PARs家族成員共有4個,分別為PAR-1、PAR-2、PAR-3和PAR-4,其中PAR-2主要分布在氣道、表皮、胃腸道、胰腺、心血管以及神經(jīng)系統(tǒng),并參與多種生理及病理生理過程,胰蛋白酶是最有效的PAR-2激活劑。 目前研究提示,PAR-2可能在內(nèi)臟疼痛特別是胰腺疼痛中起重要

3、的作用。許多研究證實,胸腰部的背根神經(jīng)節(jié)傷害性神經(jīng)元均表達(dá)PAR-2。鞘內(nèi)置管給予亞炎癥濃度的胰蛋白酶可激活脊髓背角神經(jīng)元傷害性感受傳遞,并呈劑量依賴性。給清醒大鼠胰管內(nèi)注入胰蛋白酶或PAR-2特異性肽激動劑可引起疼痛行為反應(yīng)。胰管內(nèi)提前注入PAR-2特異性激活肽類似物可以消除大鼠對胰蛋白酶的反應(yīng)。以上結(jié)果提示,激活的胰蛋白酶通過PAR-2引發(fā)疼痛可能是胰腺炎疼痛的重要機制之一。 但是,在胰腺癌癥患者發(fā)生的疼痛中PAR-2是否參

4、與,目前尚未有直接的文獻(xiàn)報道。而在胰腺癌的患者中,大部分出現(xiàn)胰蛋白酶增高的現(xiàn)象。因此,PAR-2在胰腺癌痛發(fā)生中的作用亟待證實。 方法： 本課題以人的胰腺癌組織作為實驗材料,結(jié)合生物化學(xué)、分子生物學(xué)、膜片鉗、原代神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)、動物行為學(xué)等實驗技術(shù)手段重點關(guān)注PAR-2在胰腺癌痛發(fā)生機制中的作用。進(jìn)行了以下研究：(1)胰腺腫瘤標(biāo)本的采集與病理學(xué)檢驗。(2)胰腺腫瘤組織蛋白水解酶釋放的鑒定與定量。(3)胰腺腫瘤組織釋放的蛋白

5、水解酶在體作用對大鼠熱痛與機械痛的影響及其機制。(4)胰腺腫瘤組織釋放的蛋白水解酶對培養(yǎng)的新生鼠背根神經(jīng)節(jié)(Dorsal root ganglion,DRG)神經(jīng)元膜電生理的影響及其機制。 結(jié)果： (1)胰腺腫瘤標(biāo)本經(jīng)病理學(xué)檢驗為胰頭腺癌,中度分化,患者術(shù)前有中上腹持續(xù)性鈍痛,黃疸,消瘦等臨床表現(xiàn),視覺模擬評分(Visual analogue scale,VAS)>5分。 (2)胰腺腫瘤組織勻漿后胰蛋白酶的表達(dá)遠(yuǎn)

6、遠(yuǎn)高于正常胰腺組織對照組,將胰腺腫瘤組織小塊用HBSS培養(yǎng)液孵育后,其蛋白水解酶的釋放與對照組相比顯著增加。 (3)胰蛋白酶以及胰腺腫瘤組織孵育上清注入大鼠足底部,可引起大鼠明顯的熱痛覺過敏和機械性異常性疼痛。而腫瘤組織孵育上清加入廣譜的絲氨酸蛋白酶抑制劑FUT-175后再行足底注射,其引起的熱痛和機械痛明顯降低。而使用正常胰腺組織孵育上清做同樣處理,與生理鹽水的陰性對照組相比,沒有顯著差異。 (4)在培養(yǎng)的新生鼠DRG

7、神經(jīng)元上,胰腺腫瘤組織孵育上清預(yù)處理可引起辣椒素敏感電流的增加。給予胰蛋白酶或PAR-2受體的激活肽SL-NH2同樣可引起辣椒素敏感電流的增加。而沒有蛋白水解酶活性的對照肽LR-NH2的預(yù)處理對此電流沒有明顯影響。而采用能夠拮抗PAR-2受體活性的合成肽FSLLRY-NH2預(yù)孵育DRG神經(jīng)元,然后再觀察胰腺癌組織上清對辣椒素誘導(dǎo)電流的影響,發(fā)現(xiàn)FSLLRY-NH2能夠有效抑制胰腺癌組織上清的促進(jìn)作用。 結(jié)論： 本結(jié)果表明

8、,此胰腺腫瘤組織標(biāo)本的胰蛋白酶表達(dá)增加,蛋白水解酶活性增高,腫瘤組織孵育上清可在體激活傷害性感受神經(jīng)元,引起軀體傷害性感受行為的發(fā)生,并且這種作用與蛋白酶的活性有關(guān)。在培養(yǎng)的DRG神經(jīng)元上,胰腺腫瘤組織孵育上清預(yù)處理可引起瞬時受體電位(Transient receptor potential vanilloid-like,TRPV)電流的增加,而給予拮抗PAR-2受體活性的合成肽FSLLRY-NH2后可抑制這種促進(jìn)作用,提示胰腺腫瘤組織