單核細(xì)胞化絲素支架對平滑肌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf

1、目前許多研究證明組織工程血管支架在體內(nèi)的再造機(jī)制是一種炎癥反應(yīng)介導(dǎo)的血管重塑過程，炎癥反應(yīng)是宿主對損傷和異物產(chǎn)生的一種正常的應(yīng)答機(jī)制，其強(qiáng)度和持久性對材料在體內(nèi)的穩(wěn)定性和生物相容性產(chǎn)生影響。單核/巨噬細(xì)胞是調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)的重要細(xì)胞，可以通過細(xì)胞間直接接觸或旁分泌途徑對血管重要組分平滑肌細(xì)胞的生物學(xué)行為產(chǎn)生影響。
　　為了研究單核/巨噬細(xì)胞在體內(nèi)和體外對血管平滑肌生物學(xué)行為的影響，以便進(jìn)一步更好地調(diào)控組織工程血管支架移植后單核/巨噬細(xì)

2、胞及平滑肌細(xì)胞的浸潤和功能表型，本文首先采用冷凍干燥法制備絲素蛋白支架，這種方法制備的支架具有可控的孔徑連通度，良好的細(xì)胞相容性，然后分別從絲素支架的體外細(xì)胞培養(yǎng)和體內(nèi)皮下埋植兩方面進(jìn)行研究。
　　首先體外細(xì)胞培養(yǎng)部分，通過在絲素支架上種植外周血來源的單核細(xì)胞，考察血管平滑肌細(xì)胞在單核細(xì)胞化的絲素支架上遷移、增殖及收縮表型的改變。利用掃描電鏡(SEM)觀察單核細(xì)胞在絲素材料上的表面形貌，并對DiI標(biāo)記的平滑肌進(jìn)行熒光拍照，觀察共培

3、養(yǎng)條件下平滑肌向支架內(nèi)的遷移情況。旁分泌途徑中，通過MTT實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)、qPCR觀察單核細(xì)胞化絲素支架下的條件培養(yǎng)基對平滑肌細(xì)胞增殖、遷移及SM22基因表達(dá)情況的影響。結(jié)果顯示，單核細(xì)胞的種植促進(jìn)了平滑肌細(xì)胞在絲素支架材料內(nèi)的遷移、粘附和增殖，并且絲素支架微環(huán)境下的單核細(xì)胞更有利于血管平滑肌維持收縮表型。
　　對于單核細(xì)胞化絲素支架在體內(nèi)的研究，首先利用H&E染色對材料的細(xì)胞化進(jìn)行評價(jià)，然后通過免疫熒光染色對平滑肌

4、(α-SMA)進(jìn)行定量分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)單核細(xì)胞的種植在一定程度上減少了大鼠體內(nèi)平滑肌細(xì)胞的浸潤，與體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果相反。為進(jìn)一步考察這一現(xiàn)象出現(xiàn)的原因，我們利用免疫熒光染色技術(shù)對大鼠內(nèi)源性的巨噬細(xì)胞(CD68)及其兩種分型M1、M2進(jìn)行定量考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，種植的外源性單核細(xì)胞在皮下埋植后逐漸消失并伴隨大鼠內(nèi)源性巨噬細(xì)胞浸潤地明顯減少，表明單核細(xì)胞的種植在一定程度上減輕了材料在體內(nèi)的炎癥反應(yīng)，降低了內(nèi)源性巨噬細(xì)胞的遷移和浸潤程度。并且通過熒