托瑞米芬影響內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞生物學(xué)行為及機(jī)制的研究.pdf

1、冠狀動脈疾病（CAD）是目前嚴(yán)重威脅人類身體的重大疾病之一，在病變部位置入藥物洗脫支架（DESs）是迄今最好的治療方法，可減少血管再狹窄的幾率，但再狹窄率（ISR）并沒有完全消除，因此，再狹窄的預(yù)防和治療成為心血管疾病研究領(lǐng)域中的熱點(diǎn)。如何實(shí)現(xiàn)快速內(nèi)皮化和抑制平滑肌過度增生是目前預(yù)防再狹窄面臨的兩大挑戰(zhàn)。本文通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，探究新一代抗腫瘤藥物托瑞米芬（TOR）對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）和血管平滑肌細(xì)胞（VSMCs）的細(xì)胞生物

2、學(xué)行為的影響及其作用機(jī)制。本文主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下：
　　①TOR影響內(nèi)皮細(xì)胞生物學(xué)行為。研究表明TOR能抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖且隨著TOR濃度增大其抑制作用也逐漸加強(qiáng)；顯著促進(jìn)了內(nèi)皮細(xì)胞的早期凋亡，晚期凋亡及細(xì)胞壞死；抑制內(nèi)皮細(xì)胞的分裂并將細(xì)胞阻滯在G0G1期；延遲了內(nèi)皮細(xì)胞的粘附時間卻并未影響其粘附總數(shù)；顯著抑制細(xì)胞的運(yùn)動和遷移行為；≥7.5μM的TOR可以明顯地改變細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)。
　?、赥OR影響內(nèi)皮細(xì)胞的機(jī)制。免疫熒光

3、和免疫印記雙重驗(yàn)證的方法檢驗(yàn)PCNA、P53及Rho/ROCK信號通路的關(guān)鍵蛋白的表達(dá)量。研究結(jié)果表明：TOR濃度愈高，PCNA的表達(dá)量明顯降低，暗示TOR抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖的作用就愈明顯；而P53的表達(dá)隨TOR濃度的增加而增加，說明TOR是通過促進(jìn)P53的表達(dá)而加速細(xì)胞的凋亡；TOR顯著抑制了整合素Integrinβ1及Rho的表達(dá)，進(jìn)而降低了ROCK信號通路中下游因子MLC和pMLC的表達(dá)水平。說明TOR可能是通過Integrinβ1

4、-Rho-ROCK-(p)MLC信號通路抑制內(nèi)皮細(xì)胞的遷移行為。
　?、跿OR影響平滑肌細(xì)胞生物學(xué)行為。研究表明該藥物也能抑制平滑肌細(xì)胞增殖且隨著濃度增大抑制作用逐漸增強(qiáng)；顯著促進(jìn)了平滑肌細(xì)胞的早期凋亡，晚期凋亡及細(xì)胞壞死；抑制平滑肌細(xì)胞的分裂并將細(xì)胞阻滯在G0G1期；延遲了平滑肌細(xì)胞的粘附時間并影響其粘附總數(shù)；顯著抑制平滑肌細(xì)胞群體的運(yùn)動和遷移行為；高濃度的TOR可以明顯改變細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)。
　?、躎OR影響平滑肌細(xì)胞的機(jī)

5、制。采用免疫熒光和免疫印記雙重驗(yàn)證的方法分別對PCNA，P53及Rho/ROCK信號通路中的關(guān)鍵蛋白的表達(dá)量進(jìn)行分析，并運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)對TOR影響平滑肌細(xì)胞的調(diào)亡行為作進(jìn)一步的探討。結(jié)果表明：隨著TOR濃度增高，PCNA表達(dá)量明顯降低，抑制平滑肌細(xì)胞增殖的作用就愈明顯；而P53的表達(dá)隨TOR濃度的增加而增加，說明TOR是通過促進(jìn)P53的表達(dá)而加速細(xì)胞的凋亡；高濃度TOR促進(jìn)了平滑肌線粒體膜電位下降進(jìn)而使釋放的活性氧水平升高，激活casp