多西他賽影響內(nèi)皮細(xì)胞生物學(xué)行為及抑制其遷移機制的研究.pdf

1、冠狀動脈疾病（CAD）一直是威脅人類健康的幾大殺手之一，目前最好的治療手段是在病變部位置入藥物洗脫支架（DESs），可一定程度上減少血管再狹窄的幾率。但臨床結(jié)果表明，DESs雖降低了血管再狹窄，卻大大延遲了支架內(nèi)皮化的時間，治療效果不理想。究其原因，DESs上攜帶的抗增殖類藥物的使用，這類藥物多為紫杉醇及其衍生物等，他們大多無細(xì)胞特異性，在抑制中膜細(xì)胞增殖的同時；也抑制了內(nèi)膜細(xì)胞的增殖，使損傷的內(nèi)膜未能快速修復(fù)。然而這些藥物延遲內(nèi)皮化的

2、詳細(xì)機理卻不清楚，特別是如何延遲內(nèi)皮細(xì)胞快速遷移至損傷位點的機制。基于此，本研究以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)為細(xì)胞模型，體外探究紫杉醇的類似物多西他賽（DTX）對HUVECs的影響及其作用機制，重點關(guān)注細(xì)胞運動和遷移的經(jīng)典信號通路ROCK是否參與了DTX相關(guān)的HUVECs遷移。試圖揭示DTX延遲內(nèi)皮化的原因，探究快速內(nèi)皮化潛在靶點，且為DTX的臨床應(yīng)用提供更廣泛的理論依據(jù)。
　　主要研究結(jié)果如下：
　　1DTX影響HU

3、VECs生物學(xué)行為的濃度依賴性：細(xì)胞增殖結(jié)果表明，中等劑量的DTX（0.5ng/ml，5ng/ml）即可顯著抑制HUVECs的增殖且具有濃度和時間依賴性；流式細(xì)胞儀檢測表明，高劑量的DTX（50ng/ml）出現(xiàn)了明顯的細(xì)胞毒性，顯著促進了細(xì)胞的凋亡（包括早期凋亡，晚期凋亡和壞死）；細(xì)胞粘附結(jié)果表明，DTX僅延遲了細(xì)胞的粘附時間并未影響其粘附總數(shù)；單個HUVECs（活細(xì)胞工作站）和群體細(xì)胞（劃痕法和transwell法）的運動和遷移結(jié)果表

4、明，低劑量的DTX（0.05ng/ml）可顯著抑制單個細(xì)胞和群體細(xì)胞的遷移。表明DTX抑制HUVECs遷移的效應(yīng)更加敏感。
　　2DTX影響細(xì)胞增殖和的凋亡相關(guān)基因的表達(dá)：采用免疫熒光和免疫印跡方法分別對反映細(xì)胞增殖情況的蛋白PCNA和表征細(xì)胞凋亡的蛋白p53的表達(dá)水平進行了定性定量分析。研究結(jié)果表明：DTX濃度愈高，PCNA的表達(dá)越低且p53的表達(dá)越高，說明DTX通過促進促凋亡基因p53的表達(dá)加速了細(xì)胞的凋亡，這種效應(yīng)在DTX的

5、濃度為50ng/ml時最為顯著。
　　3DTX抑制HUVECs遷移的機制：DTX顯著抑制了黏著斑蛋白Integrinβ1的表達(dá)，降低了ROCK信號通路中MLC的磷酸化水平，且在ROCK的抑制劑Y-27632預(yù)處理細(xì)胞后這種效應(yīng)愈加顯著，還大大降低了細(xì)胞的遷移數(shù)目。說明DTX可能是通過Integrinβ1-ROCK-（p）MLC信號通路抑制細(xì)胞的遷移。
　　4DTX影響了HUVECs的功能：免疫熒光和免疫印跡定性定量研究表明，