HCMV感染血管內(nèi)皮細胞和平滑肌細胞的生物學效應(yīng)研究.pdf

1、背景和目的:動脈粥樣硬化(AS)嚴重威脅人類健康,雖然大量的流行病學資料顯示傳統(tǒng)的危險因子是動脈粥樣硬化的主要危險因素,但動脈粥樣硬化仍然有著許多潛在的病因亟待探索.低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白(LRP)是在AS病變部位SMC上表達的唯一脂蛋白受體,LRP結(jié)構(gòu)或功能的紊亂可能是引發(fā)AS形成和發(fā)展的一個重要因素,LRP作為AS疾病的一個危險因子,其致病的主要原因可能是促發(fā)泡沫細胞的形成,HCMV感染后SMC的LRP表達及脂質(zhì)代謝方面的變化及其

2、機理是該課題重點研究內(nèi)容.如果調(diào)節(jié)和控制病毒對宿主細胞的作用是病毒性疾病治療和預(yù)防的一個重要方面.綜上所述,我們設(shè)想:1、HCMV與ECs:①HCMV感染ECs可能導致細胞形態(tài)改變,引起通透性改變和內(nèi)皮完整性的變化;②感染后的細胞功能可能發(fā)生改變,進一步導致血小板及單核細胞在內(nèi)皮的粘附;③感染性病毒顆粒的釋放可能成為侵襲SMC的病毒來源.2、HCMV與SMC:①HCMV感染SMC可能導致感染細胞的增殖;②HCMV所誘導的轉(zhuǎn)化作用可能會導

3、致SMC表面LRP活性的異常表達,進而引起宿主細胞脂質(zhì)代謝的改變;③HCMV病毒感染可能對SMC粘附分子表達產(chǎn)生影響;④外源性更昔洛韋、HCMV的ASON對IE基因和L基因,SMC的LRP表達、TG和TC的代謝產(chǎn)生影響.基于以上設(shè)想,擬主要觀測:①感染細胞形態(tài)、脂質(zhì)代謝變化,主要包括IE基因、L基因變化、粘附分子改變.②感染細胞表面LRP變化及細胞脂質(zhì)代謝、病毒核酸代謝、病毒抗原表達;③更昔洛韋、HCMV的ASON作用后平滑肌細胞IE基

4、因及LRP表達等方面的變化;④從分子水平調(diào)查CHD患者HCMV的感染狀況.探討以上內(nèi)容的變化特點和規(guī)律,在細胞和分子水平上闡述HCMV致血管壁細胞的生物學效應(yīng),為HCMV致AS發(fā)病機理的研究及其治療和預(yù)防提供一定的理論基礎(chǔ).方法和技術(shù)路線:1.采用HCMV AD169株感染體外培養(yǎng)的血管內(nèi)皮細胞和平滑肌細胞,建立HCMV的細胞感染模型.2.對于血管內(nèi)皮細胞的感染模型,主要運用熒光顯微鏡觀測病毒抗原的表達,熒光定量PCR方法動態(tài)觀測病毒D

5、NA代謝變化,ELISA和細胞ELISA方法檢測感染細胞粘附分子(sICAM-1、VCAM-1)的變化,流式細胞儀動態(tài)測定HEC感染后的凋亡狀況,化學法測定ECs感染后的ATP酶活性的改變.3.對于平滑肌細胞體外感染模型,實驗分四組(對照組;感染組;更昔洛韋作用組;反義寡核苷酸作用組),主要應(yīng)用RT-PCR方法和細胞ELISA觀測不同因素作用后LRP-mRNA和蛋白的表達,微量化學分析法測定細胞內(nèi)脂質(zhì)的改變,應(yīng)用PCR方法檢測HCMV的

6、IE基因、L基因的變化規(guī)律,常規(guī)法觀測SMC增殖指數(shù)的變化.4.為驗證HCMV感染對冠狀動脈粥樣硬化的效應(yīng),運用ELISA和捕捉ELISA法、放射免疫分析技術(shù)、定量PCR技術(shù)檢測了經(jīng)冠脈造影確診的119例CHD患者血清HCMV-IgM、IgG抗體、HCMV-DNA、血清ET、TNF和hs-CRP的水平.5.各項指標以均數(shù)±標準差(x±S)表示,兩組均值間比較用t檢驗,各組間率的比較采用X<'2>檢驗,統(tǒng)計學處理均在計算機上用origan