20-羥二十烷四烯酸對絨毛膜滋養(yǎng)細胞和子宮血管平滑肌細胞生物學行為的影響.pdf

1、目的：子癇前期是一種常見的孕婦多系統(tǒng)紊亂綜合征，是母體、胎兒發(fā)病率和病死率最高的疾病之一，其發(fā)病機制尚不清楚，但具有共同的病理學特征，即子宮螺旋動脈重塑不全。螺旋動脈重塑是正常妊娠的關鍵。妊娠初期，螺旋動脈管內、外的絨毛膜滋養(yǎng)細胞，與血管內皮細胞、平滑肌細胞相互作用，介導其凋亡，并分泌基質金屬蛋白酶(MMPs)降解螺旋動脈管壁的彈性基質，同時分泌無定型類纖維素樣物質取代細胞外基質，形成絨毛外滋養(yǎng)細胞及纖維素樣物質成為螺旋動脈管壁。重塑中

2、任何環(huán)節(jié)異常，將導致重塑不全和子癇前期。新近研究表明，花生四烯酸代謝產物20-羥二十烷四烯酸(20-HETE)是血管內皮細胞及平滑肌細胞增殖、凋亡等的重要調節(jié)因子，其代謝異常與血管功能紊亂性疾病相關。綜合子癇前期、螺旋動脈重塑調控機制以及20-HETE的相關特征，本課題提出:20-HETE作為參與重塑過程及血管維護的多個信號轉導系統(tǒng)的上游調控因子，其代謝異常，相關信號不能準確轉導，導致螺旋動脈重塑障礙以及血管功能紊亂，引發(fā)子癇前期。為證

3、實該假說，本課題應用20-HETE及其抑制劑(HET0016)干預子宮螺旋動脈重塑過程的主要參與細胞（絨毛膜滋養(yǎng)細胞和子宮血管平滑肌細胞），研究20-HETE對絨毛膜滋養(yǎng)細胞、子宮血管平滑肌細胞增殖、凋亡和絨毛膜滋養(yǎng)細胞介導子宮血管平滑肌細胞凋亡的影響，分析20-HETE對絨毛膜滋養(yǎng)細胞浸潤過程中MMP-2分泌水平的作用環(huán)節(jié)。探討20-HETE對子宮螺旋動脈重塑的影響，可能為子癇前期的發(fā)病機制提供新思路。
　　方法：⑴建立傳代絨毛

4、膜滋養(yǎng)細胞和傳代子宮血管平滑肌細胞單培養(yǎng)以及絨毛膜滋養(yǎng)細胞與子宮血管平滑肌細胞干預模型。⑵藥物最佳濃度和作用時間的確定:20-HETE及抑制劑(HET0016)以濃度梯度方式分別干預人絨毛膜滋養(yǎng)細胞(HVT)、人子宮血管平滑肌細胞(HUVSMC)24小時或48小時，MTT法檢測細胞增殖情況。⑶HVT遷移能力檢測:Transwell小室測定HVT遷移數(shù)目。⑷HVT浸潤能力檢測:RT-PCR測定HVT基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)mRNA

5、水平，免疫組織化學技術測定HVT MMP-2蛋白表達，ELISA測定HVT培養(yǎng)上清液MMP-2的濃度。⑸HVT和HUVSMC的凋亡測定:流式細胞術。
　　結果：①藥物最佳作用濃度及時間:10ng/ml20-HETE作用48h后顯著促進HVT、HUVSMC的增殖;10μg/ml HET0016作用48h后顯著抑制HVT、HUVSMC的增殖。②20-HETE抑制HVT的遷移能力:HVT單培養(yǎng)時，與對照組相比，20-HETE組的Tran

6、swell小室中HVT的遷移數(shù)目明顯減少;20-HETE與HET0016聯(lián)合干預組的遷移數(shù)目顯著減少;HET0016組的遷移數(shù)目顯著增加。③20-HETE抑制HVT的浸潤能力:HVT單培養(yǎng)時，與對照組相比，20-HETE組，HVT MMP-2的轉錄水平、蛋白表達及上清液濃度明顯降低;20-HETE與HET0016聯(lián)合干預組，其轉錄水平、蛋白表達及上清液濃度顯著降低;HET0016組，其轉錄水平、蛋白表達及上清液濃度顯著升高。④20-HE

7、TE抑制HVT和HUVSMC的凋亡:無論HVT、HUVSMC單培養(yǎng)，還是HVT-HUVSMC共培養(yǎng)，與對照組相比，20-HETE組，HVT、HUVSMC的凋亡率明顯降低;20-HETE與HET0016聯(lián)合干預組，HVT、HUVSMC的凋亡率顯著降低;HET0016組，HVT、HUVSMC的凋亡率顯著升高。
　　結論：20-HETE作為參與重塑過程及血管維護的多個信號轉導系統(tǒng)的上游調控因子，能夠促進絨毛膜滋養(yǎng)細胞、子宮血管平滑肌細胞