不同fimA型牙齦卟啉單胞菌菌毛蛋白對人臍動脈平滑肌細胞生物學行為的影響.pdf

1、目的：分析比較Ⅰ、Ⅱ fimA型牙齦卟啉單胞菌菌毛蛋白(P.gingivalis-rFimA)對人臍動脈平滑肌細胞（HUASMCs）的增殖、遷移能力以及表型轉(zhuǎn)化的影響，探討不同fimA型P.gingivalis-rFimA的侵襲在動脈粥樣硬化（As）發(fā)生發(fā)展過程中的可能作用。
　　方法：1、體外培養(yǎng)的HUASMCs，加入96孔培養(yǎng)板，采用CCK-8檢測不同終濃度的P.gingivalis-rFimA(0.5μg/ml、1μg/ml

2、、2μg/ml、5μg/ml、10μg/ml)在2h、8h、24h、48h對平滑肌細胞增殖的影響，酶標儀450nm處測定各組OD值，并確定rFimA促增殖效應的最適濃度。2.采用上述確定最適濃度10μg/ml的P.gingivalis-rFimA，與HUASMCs共培養(yǎng)2h、8h、24h、48h后，通過Transwell細胞遷移實驗檢測HUASMCs的遷移情況，透射電鏡觀察細胞超微結(jié)構(gòu)，流式細胞術(shù)檢測收縮型標志蛋白平滑肌肌球蛋白重鏈（s

3、mooth muscle myosin heavy chain, SM-MHC）和合成型標志細胞視黃醇結(jié)合蛋白-1（cellular retinol bindingprotein-1, CRBP-1）的表達變化情況。
　　結(jié)果：1、在不同時間點，Ⅰ型和Ⅱ型P.gingivalis-rFimA組的促HUASMCs增殖作用均比陰性對照組強，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。隨著濃度的增加Ⅰ型和Ⅱ型P.gingivalis-rFimA組

4、的促HUASMCs增殖作用也增強（P<0.05）。在同一刺激濃度和作用時間點，Ⅱ fimA型P.gingivalis-rFimA刺激HUASMCs增殖作用強于Ⅰ型P.gingivalis-rFimA(P<0.05)。
　　2、在不同時間點，Ⅰ和Ⅱ fimA型P.gingivalis-rFimA刺激組的HUASMCs遷移細胞數(shù)目均比陰性對照組多，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。隨著時間延長，各組的HUASMCs遷移細胞數(shù)目增多；2

5、h時，ⅡfimA型P.gingivalis-rFimA刺激組的HUASMCs遷移細胞數(shù)目要多于Ⅰ fimA型P.gingivalis-rFimA組，但差異無統(tǒng)計學意義（P<0.05）；在8h、24h和48h時，Ⅱ fimA型P.gingivalis-rFimA刺激組的HUASMCs遷移細胞數(shù)目要多于Ⅰ fimA型P.gingivalis-rFimA組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　3、通過電鏡觀察，在Ⅰ、Ⅱ fimA型

6、P.gingivalis-rFimA刺激組2h、8h時HUASMCs出現(xiàn)明顯的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、糖原、線粒體、吞噬體和溶酶體的增多，細胞器有不同程度的腫脹；ⅠfimA型P.gingivalis-rFimA刺激組在各個觀察點均可觀察到脂滴的出現(xiàn)；Ⅱ fimA型P.gingivalis-rFimA刺激組則在24h和48h時，細胞器開始溶解、大部分細胞結(jié)構(gòu)出現(xiàn)破壞。
　　4、在不同時間點，Ⅰ和Ⅱ fimA型P.gingivalis-rFimA

7、刺激后，均能觀察到HUASMCs的合成型標志分子CRBP-1的表達上調(diào)，收縮型標志分子SM-MHC的表達下調(diào)，而Ⅱ fimA型P.gingivalis-rFimA組上調(diào)CRBP-1表達的作用強于于Ⅰ fimA型P.gingivalis-rFimA組，在24h和48hⅡ fimA型P.gingivalis-rFimA組下調(diào)SM-MHC表達的作用強于Ⅰ fimA型P.gingivalis-rFimA組（P＜0.05）。
　　結(jié)論：Ⅰ、