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文檔簡介
1、目的：牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonas gingivalis，Pg)是慢性牙周炎病變區(qū)域或活動部位最主要的優(yōu)勢菌，該菌通過其主要黏附因子菌毛蛋白A(fimbria proteinA,FimA)黏附并入侵牙齦上皮細胞，與Pg毒力密切相關；同時FimA是Pg的表面抗原成分，具有良好的免疫反應性。本實驗克隆了牙齦卟啉單胞菌菌毛蛋白fimA基因，使其在大腸桿菌中正確表達，純化，旨在為研制增強免疫應答的高效牙周炎真核表達質粒提供抗原。<
2、br> 方法：利用PCR 方法克隆牙齦卟啉單胞菌fimA基因，構建原核表達質粒PT-BAD/fimA，獲得在大腸桿菌中的表達，基體輔助激光解吸電離-飛行時間質譜(MALDI-TOF-MS)鑒定重組蛋白。以不同濃度咪唑緩沖液(250uM、200 uM、150 uM、100 uM、50 uM)洗脫結合在His-tag 純化柱的目的蛋白，選擇最佳洗脫濃度。
結果：克隆基因測序結果與GenBank 數(shù)據庫中的序列呈現(xiàn)99.9
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