全氟己烷對大鼠肺泡巨噬細(xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf

1、目的通過研究全氟己烷對肺泡巨噬細(xì)胞所分泌的各種細(xì)胞因子的蛋白質(zhì)表達(dá)、凋亡和細(xì)胞周期以及吞噬功能的影響，探討急性肺損傷時應(yīng)用PFC治療的分子作用機(jī)理及其對肺局部防御機(jī)能的影響。 方法健康雄性Wistar大鼠放血處死后全肺灌洗獲取AM，貼壁純化。采用4種方法干預(yù)將AM分為4組：(1)正常對照(C)組：不做任何干預(yù)；(2)脂多糖(LPS)組：按10ug/ml的劑量加入LPS刺激；(3)全氟己烷(PFH)組：按30％體積比(PFH：培養(yǎng)

2、液)加入的PFH；(4)脂多糖+全氟己烷(LPS+PFH)組：加入PFH和LPS。在預(yù)培養(yǎng)20h后重懸AM，分4組干預(yù)處理4h后，收集AM，與1％雞紅細(xì)胞懸液培育后制片，瑞氏染色觀察并計(jì)算吞噬率和吞噬指數(shù)，采用單因素方差分析比較組間差異；提取各組細(xì)胞的蛋白質(zhì)應(yīng)用蛋白質(zhì)芯片飛行時間質(zhì)譜技術(shù)比較組間的蛋白質(zhì)表達(dá)差異；在純化后即用無血清培養(yǎng)液培養(yǎng)并分為4組干預(yù)24h。收集AM，應(yīng)用透視電鏡進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，并聯(lián)合流式細(xì)胞技術(shù)采用單因素方差分析比

3、較各組間凋亡率和細(xì)胞周期的差異。 結(jié)果(1)LPS組與C組、PFH組與C組及LPS組和LPS+PFH組相比較共發(fā)現(xiàn)有15個相對分子量的差異表達(dá)蛋白質(zhì)，分別為：3343Da、4796Da、4968Da、5175Da、5546Da、7600Da、7918Da、9776Da、10934Da、11529Da、14853Da(接近14849Da)、15257Da、15823Da、13763Da、14001Da。其對應(yīng)的Swiss-prot

4、蛋白數(shù)據(jù)庫中共發(fā)現(xiàn)了47種相應(yīng)的蛋白質(zhì)。(2)LPS組和LPS+PFH組的凋亡率分別明顯高于C組和LPS組(10.06±1.72％/24.10±3.19％vs1.06±0.13％/10.06±1.72％，P＜0.01)，而PFH組與C組的凋亡率比較無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(2.81±0.41％vs1.06±0.13％,P＞0.05)；細(xì)胞周期的各指標(biāo)在4組間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。(3)AM的吞噬率和吞噬指數(shù)呈線性相關(guān)性關(guān)系，從高到低依

5、次為：LPS組(25.88±2.03/3.21±0.09)，LPS+PFH組(12.50±2.07/2.29±0.08)，C組(8.25±1.67/1.73±0.18)，PFH組(3.50±1.20/1.16±0.19)，各組間的差異有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。(4)AM可吞噬雞紅細(xì)胞和PFH，且吞噬后體積增大；C組和PFH組未見明顯的凋亡變化，LPS組和PFH+LPS組可見到典型的凋亡細(xì)胞存在； 結(jié)論(1)LPS可活化