細(xì)胞因子IL-21在原發(fā)性干燥綜合征患者血清中的表達(dá)水平及意義.pdf

1、目的:
　　干燥綜合征(Sj(o)gren's syndrome，SS)是以侵犯淚腺、唾液腺等外分泌腺體，具有高度淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)為特征，同時(shí)伴有外分泌腺組織破壞和自身抗體生成的一類自身免疫病，分為原發(fā)性和繼發(fā)性兩類，原發(fā)性干燥綜合征（Primary Sj(o)gren's syndrome，pSS）為除外其他潛在自身免疫疾病及結(jié)締組織病前提下，主要影響淚腺、唾液腺功能的SS。pSS典型表現(xiàn)為干燥癥狀，通常包括口干燥癥和干燥性角膜炎。

2、其系統(tǒng)損害常累及多個(gè)器官，包括腎臟、肺、肝、胰腺、周圍或中樞神經(jīng)系統(tǒng)等。針對(duì)SS的治療，目前尚無(wú)根治及徹底恢復(fù)腺體功能的有效方法，故通常應(yīng)用支持及對(duì)癥治療。對(duì)于出現(xiàn)系統(tǒng)損害及嚴(yán)重并發(fā)癥（如肺間質(zhì)病變、血管炎、全血細(xì)胞減少等）的患者，可單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用類固醇激素及免疫抑制劑（細(xì)胞毒類藥物）治療，有時(shí)也可應(yīng)用靜注人丙種球蛋白治療。
　　濾泡型輔助性T淋巴細(xì)胞(follicular helper T cells，Tfh)是近期發(fā)現(xiàn)的CD4

3、+T細(xì)胞亞群，因其定位于濾泡生發(fā)中心而得名。Tfh的特征因子包括轉(zhuǎn)錄因子Bcl-6，表面分子CXCR5、CD40L、ICOS、PD-1等，及細(xì)胞因子IL-21、IL-4、IL-10等。Tfh正是通過(guò)上述因子的作用，行使其輔助B淋巴細(xì)胞形成GC（germinal center，GC），促進(jìn)B細(xì)胞增殖的功能，使B細(xì)胞分化為記憶B細(xì)胞和分泌抗體的漿細(xì)胞。近些年來(lái)，雖針對(duì)SS患者血清IL-21水平的研究國(guó)內(nèi)外偶有文獻(xiàn)報(bào)道，但上述論著并未從Tfh

4、的角度闡述IL-21在SS發(fā)病方面的可能機(jī)制。本課題前期研究顯示，在pSS患者的唇腺組織中，可見(jiàn)大量CXCR5及IL-21陽(yáng)性細(xì)胞浸潤(rùn)，提示Tfh細(xì)胞在SS中具有致病作用。那么SS患者的外周循環(huán)中，Tfh主要效應(yīng)因子IL-21的表達(dá)水平是否增加呢？故本課題通過(guò)對(duì)比pSS患者與健康對(duì)照人群的血清IL-21水平，pSS患者的不同臟器損傷、不同實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)與血清IL-21水平的相關(guān)性，探討IL-21的主要來(lái)源Tfh與pSS的發(fā)病機(jī)制是否存在

5、聯(lián)系，從而為針對(duì)IL-21受體的單克隆抗體在SS及其他自身免疫病治療方面的應(yīng)用提供臨床客觀依據(jù)。
　　材料:
　　實(shí)驗(yàn)對(duì)象分為兩部分。①實(shí)驗(yàn)組選取2013年1月至2013年12月在河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院免疫風(fēng)濕科住院的原發(fā)性干燥綜合征患者血清40例。依受累臟器不同又分為:繼發(fā)肺間質(zhì)病變組5例，腎小管酸中毒組3例，免疫性血細(xì)胞減少組11例，自身免疫性肝病組2例，周圍神經(jīng)病變組2例，無(wú)系統(tǒng)損害組17例。入選標(biāo)準(zhǔn):符合2002年國(guó)際

6、pSS分類標(biāo)準(zhǔn)的初診患者，除外其他自身免疫病及風(fēng)濕病，采血前未接受糖皮質(zhì)激素和免疫抑制劑治療，既往無(wú)器官移植、病毒性肝炎或HIV感染史。②正常對(duì)照組選取河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院體檢部健康人群血清30例。入選標(biāo)準(zhǔn):血常規(guī)、肝腎功能、ESR、CRP及免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)正常，年齡性別分布與實(shí)驗(yàn)組相匹配，采血前兩周內(nèi)無(wú)嚴(yán)重的細(xì)菌或病毒感染，四周內(nèi)無(wú)疫苗接種史，既往無(wú)自身免疫病、器官移植、病毒性肝炎或HIV感染。
　

7、　方法:
　　實(shí)驗(yàn)組各研究對(duì)象血清標(biāo)本為清晨空腹采集，長(zhǎng)期置-80℃環(huán)境保存，正常對(duì)照組血清標(biāo)本為實(shí)驗(yàn)前一周內(nèi)采集，-20℃環(huán)境保存。酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)法檢測(cè)所有標(biāo)本中IL-21的水平，魏氏法測(cè)定紅細(xì)胞沉降率(ESR)，免疫速率散射比濁法測(cè)定免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)，對(duì)流電泳和免疫雙擴(kuò)散法測(cè)定SSA/Ro抗體與SSB/La抗體(anti-SSA/Ro、anti-SSB/La)。
　　采用SPSS17.

8、0(SPSS Company，Chicago，Illinois，USA)版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)用(x)±s表示，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組間IL-21水平的比較采用兩個(gè)獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn);實(shí)驗(yàn)組內(nèi)，不同臟器損傷組間IL-21水平的比較，服從正態(tài)分布時(shí)采用單因素方差分析，不服從時(shí)的組間比較采用多樣本比較的秩和檢驗(yàn)，血清IL-21水平與患者其他實(shí)驗(yàn)室檢查數(shù)據(jù)間的相關(guān)性分析采用直線相關(guān)分析，計(jì)算pearson相關(guān)系數(shù)r，P＜0.05認(rèn)為其具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

9、義。
　　結(jié)果:
　　1實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組一般資料的比較:
　　實(shí)驗(yàn)組內(nèi)40例pSS患者與正常對(duì)照組的30例健康者，其年齡性別分布、患病時(shí)間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;
　　2實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組血清IL-21表達(dá)水平比較:
　　與健康對(duì)照組血清IL-21水平比較，pSS疾病組患者的血清IL-21表達(dá)水平顯著升高;
　　3實(shí)驗(yàn)組中自身抗體陽(yáng)性組的血清IL-21水平分別與陰性組、對(duì)照組比較:
　　抗SSA和（或）抗

10、SSB陽(yáng)性組血清IL-21水平較自身抗體陰性組升高，且明顯高于健康對(duì)照組水平;
　　4實(shí)驗(yàn)組中不同臟器損傷組間IL-21水平比較:
　　合并臟器損傷的患者其血清IL-21水平明顯高于實(shí)驗(yàn)組中無(wú)器質(zhì)性病變的患者;
　　5不同器官損害組與對(duì)照組血清IL-21表達(dá)水平比較:
　　pSS患者中的不同臟器損傷組血清IL-21表達(dá)水平較健康對(duì)照組顯著提高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;
　　6實(shí)驗(yàn)組患者血清IL-21水平與ESR

11、、IgG、IgA、IgM參數(shù)間的相關(guān)性分析:
　　Pearson相關(guān)分析顯示:pSS組患者血清IL-21水平與ESR指標(biāo)呈正相關(guān)(r=0.747，P＜0.01)，與血清IgG水平呈正相關(guān)(r=0.871，P＜0.01)，與IgA、IgM兩項(xiàng)指標(biāo)無(wú)明顯相關(guān)性。
　　結(jié)論:
　　1原發(fā)性干燥綜合征組患者血清中IL-21的表達(dá)水平較健康對(duì)照組明顯增高，提示:細(xì)胞因子IL-21與pSS的發(fā)病機(jī)制有關(guān);
　　2 pSS疾病

12、組內(nèi)合并不同臟器損傷的患者均較無(wú)系統(tǒng)損害的患者，其血清IL-21水平顯著提高，提示:外周循環(huán)中高表達(dá)的細(xì)胞因子IL-21可能參與了pSS系統(tǒng)損傷機(jī)制，使之更易出現(xiàn)組織損傷;
　　3 pSS疾病組內(nèi)，自身抗體陽(yáng)性組的血清IL-21水平明顯高于自身抗體陰性組，提示:細(xì)胞因子IL-21可提高pSS患者自身抗體的生成水平;
　　4 pSS疾病組患者的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)ESR、IgG與其血清IL-21表達(dá)水平呈正相關(guān)，提示:細(xì)胞因子IL-21