趨化因子CXCL12及其受體CXCR4在原發(fā)性干燥綜合征患者外周血及其T淋巴細(xì)胞中的表達(dá).pdf

1、目的:原發(fā)性干燥綜合征(primary Sjogren's syndrome，pSS)是一種以侵犯唾液腺、淚腺等外分泌腺體，具有高度淋巴細(xì)胞灶性浸潤為特征的彌漫性結(jié)締組織疾病，國內(nèi)發(fā)病率約為0.3％-0.7％，是一種嚴(yán)重危害人們身心健康的常見病和多發(fā)病。臨床上主要表現(xiàn)為干燥性角、結(jié)膜炎，口腔干燥癥，還可累及全身多個(gè)器官和系統(tǒng)如肺、肝、腎、胰腺及血液系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)等。目前干燥綜合征發(fā)病機(jī)制仍不明確，對細(xì)胞因子在原發(fā)性干燥綜合征發(fā)病中作用的

2、研究是一熱點(diǎn)問題，多集中在γ干擾素、IL-6、IL-17、TNF-α等領(lǐng)域，關(guān)于CXCL12/CXCR4在pSS發(fā)病中的作用研究少見報(bào)道。本研究旨在通過探討CXCL12/CXCR4在原發(fā)性干燥綜合征患者外周血及其淋巴細(xì)胞中的表達(dá)情況，分析其與自身抗體的表達(dá)、唇腺病理分級、疾病活動(dòng)指數(shù)的相關(guān)性，初步了解CXCL12/CXCR4軸在原發(fā)性干燥綜合征發(fā)生發(fā)展中的作用，為原發(fā)性干燥綜合征的發(fā)病機(jī)制及臨床診療研究提供新的思路。
　　方法:<

3、br>　　1.病例選擇:收集河北省人民醫(yī)院風(fēng)濕免疫科2013年5月-2013年12月，30例原發(fā)性干燥綜合征住院及門診初診病人，為試驗(yàn)組，均符合2002年修訂的干燥綜合征國際診斷（分類）標(biāo)準(zhǔn)，且除外腫瘤性疾病、其他自身免疫性等疾病，無特殊用藥史（免疫抑制劑、糖皮質(zhì)激素類藥物等）。對照組25例，為年齡、性別與原發(fā)干燥綜合征組匹配的健康志愿者。
　　2.實(shí)驗(yàn)方法:采用流式技術(shù)檢測T淋巴細(xì)胞表面CXCR4的表達(dá)情況，RT-PCR檢測外周

4、血單個(gè)核細(xì)胞CXCR4mRNA的表達(dá)情況、采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA法)測定外周血CXCL12的含量。
　　3.分別使用免疫印跡法、散射比濁法、間接免疫熒光法檢測患者血清中抗SSA抗體、抗SSB抗、RF以及ANA抗體。
　　4.pSS患者進(jìn)行疾病活動(dòng)指數(shù)評估:依照2009年歐洲抗風(fēng)濕病聯(lián)盟(EULAR)制定SS病情評估指數(shù)（ESSDAI），對pSS患者進(jìn)行疾病活動(dòng)度的評估。
　　5.唇腺病理分級:使用福

5、爾馬林液固定唇腺病理組織、石蠟包埋并進(jìn)行切片、然后進(jìn)行HE染色，唇腺活檢病理分級按Chisholm標(biāo)準(zhǔn)分為Ⅰ～Ⅳ級。
　　6.統(tǒng)計(jì)分析:應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料符合正態(tài)分布的結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)差((x)±s)表示，多組樣本間均數(shù)比較采用Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)，非正態(tài)分布的資料采用中位數(shù)（四分位間距）[M(P25，P75)]，兩組資料比較采用非參數(shù)Mann-Whitney U檢驗(yàn)，兩組間且符合正態(tài)

6、分布者比較采用t檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
　　結(jié)果:
　　1.pSS患者外周血中CXCL12的表達(dá)水平:pSS患者組的CXCL12的表達(dá)水平411.0(337.2，481.5)pg/ml，與對照組72.0(63.5，94.0)pg/ml相比均明顯增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.001。
　　2.pSS患者外周血T淋巴細(xì)胞表面CXCR4的表達(dá):pSS患者組T淋巴細(xì)胞表面CXCR4表達(dá)陽性率21.0(16.9，26.

7、0)％顯著高于健康對照組4.7(3.25,6.0)％,P＜0.001。
　　3.pSS患者外周血單個(gè)核細(xì)胞CXCR4mRNA的表達(dá):pSS患者組CXCR4mRNA的表達(dá)相對數(shù)為8.05(6.76，9.31)，對照組為2.13(1.56，2.68)，兩組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05。
　　4.pSS患者CXCL12/CXCR4的表達(dá)與自身抗體的相關(guān)性:30例pSS患者中，18例ANA陽性(60％)，13例抗SSA抗體陽

8、性(43％)，15例抗SSB抗體陽性(50％)，18例RF陽性(60％)?？贵w陽性組定義為至少具有上述一項(xiàng)抗體陽性者;抗體陰性組定義為上述抗體均為陰性者，其中抗體陽性組18例，抗體陰性組12例?？贵w陽性組外周血中的CXCL12的表達(dá)水平為415.5(376.8，481.5) pg/ml，抗體陰性組為379.9(236.5，486.8)pg/ml，P＞0.05，組間差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;抗體陽性組T淋巴細(xì)胞表面CXCR4表達(dá)陽性率(23.0±

9、5.1)％，抗體陰性組為(20.0±4.6)％，組間差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＞0.05。
　　5.pSS患者CXCL12/CXCR4的表達(dá)與唇腺病理分級的相關(guān)性:30例pSS患者唇腺病理分級Ⅳ級有17例，Ⅲ級有13例。其外周血中的CXCL12的表達(dá)水平分別為(361.8±85.86) pg/ml和(374.0±33.08) pg/ml，兩組之間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）。其T淋巴細(xì)胞表面CXCR4表達(dá)陽性率分別為(21.41±4

10、.97)％和(22.35±5.34)％，兩組之間比較，組間差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＞0.05。
　　6.pSS患者CXCL12/CXCR4的表達(dá)與疾病活動(dòng)指數(shù)的相關(guān)性:將pSS患者疾病活動(dòng)指數(shù)由低到高分為4個(gè)等級，0-2分為Ⅰ級，3-5分為Ⅱ級，6-8分為Ⅲ級，9分以上為Ⅳ級，其患者病例數(shù)分別為12、7、6、5。其外周血中的CXCL12的表達(dá)水平分別為432.0(361.3，500.5) pg/ml、386.0(233.0,386.0

11、) pg/ml、412.0(360.5,538.5) pg/ml、377.0(342.5,,419.0)pg/ml;其T淋巴細(xì)胞表面CXCR4的表達(dá)分別為21.5(17.0，26.6)％、18.1(15.8,18.1)％、22.9(19.4,22.9)％、22.0(15.4,20.2)％。行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)CXCL12/CXCR4在不同疾病活動(dòng)指數(shù)的pSS患者中的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＞0.05。
　　結(jié)論:
　　1.pS

12、S患者外周血中CXCL12、T淋巴細(xì)胞表面的CXCR4以及外周單個(gè)核細(xì)胞CXCR4mRNA均呈現(xiàn)高表達(dá)，提示CXCL12/CXCR4在原發(fā)性干燥綜合征的發(fā)生和發(fā)展中起著重要的作用。
　　2.CXCL12/CXCR4在pSS患者抗體陽性組和抗體陰性組的表達(dá)水平?jīng)]有差異，提示pSS患者CXCL12/CXCR4的表達(dá)與自身抗體的產(chǎn)生無關(guān)。
　　3.pSS患者CXCL12/CXCR4的表達(dá)與不同唇腺病理分級和不同疾病活動(dòng)指數(shù)無相關(guān)性