調(diào)節(jié)性B細胞和APRIL在原發(fā)性干燥綜合征患者外周血中的表達及意義.pdf

1、目的：原發(fā)性干燥綜合征(primarysj?gren’ssyndrome,pSS)是一種以淚腺、唾液腺等外分泌腺體受累，具有高度淋巴細胞浸潤為特征的彌漫性結(jié)締組織病。臨床上主要表現(xiàn)為干燥性角、結(jié)膜炎，口腔干燥癥，還可累及肺臟、肝臟、腎臟、血液、骨骼肌肉、神經(jīng)等多個臟器和系統(tǒng)。pSS病因和發(fā)病機制未明，研究發(fā)現(xiàn)其發(fā)病與遺傳因素、環(huán)境因素、多種免疫細胞及相關(guān)細胞因子有關(guān)。調(diào)節(jié)性B細胞(regulatoryBcell,Breg)在pSS發(fā)病中

2、的作用是當前研究的熱點之一。本研究通過檢測原發(fā)性干燥綜合征患者外周血中調(diào)節(jié)性B淋巴細胞數(shù)目及增殖誘導配體(aproliferationinducingligand,APRIL)表達水平，分析研究其與免疫球蛋白水平、自身抗體表達、唇腺病理等級以及疾病活動度的相關(guān)性，來探討CD19+CD5+CD1dhiBreg和APRIL在pSS發(fā)病發(fā)展中的作用，為pSS的診斷和治療提供新的靶點和思路。
　　方法：
　　1、病例選擇及分組：選取

3、河北省人民醫(yī)院風濕免疫科自2015年4月至2015年10月初治的pSS患者30例作為實驗組，所有患者均符合2002年修訂的pSS國際分類診斷標準，并且排除有其他結(jié)締組織病、頸頭面部放療史、丙肝病毒感染、AIDS、淋巴瘤、移植物抗宿主病、應(yīng)用抗乙酰膽堿藥等。另外，選取年齡、性別與實驗組pSS患者匹配的健康志愿者20例為對照組。將pSS患者按照自身抗體的有無、唇腺等級及ESSDAI評分等級進行不同的分組。
　　2、實驗方法：采用流式細

4、胞術(shù)檢測表型為CD19+CD5+CD1dhiBreg的百分比；酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清中APRIL的表達水平；收集入組患者的基本信息，臨床資料，其中臨床指標包括WBC、RBC、Plt、Hb、ANA(anti-nuclearantibody,ANA)、ENA抗體譜、類風濕因子(rheumatoidfactor,RF)、免疫球蛋白(immuneglobulin，Ig)、C反應(yīng)蛋白(Creactiveprotein,CRP)、血沉(erythr

5、ocytesedimentationrate,ESR）、補體C3(complement3,C3）、C4(complement4,C4)。
　　3、唇腺病理分級：取患者下唇腺病理組織，福爾馬林液固定，石蠟包埋，切片，然后進行HE染色。根據(jù)Chisholm標準分為I～Ⅳ級。
　　4、患者疾病活動指數(shù)評估：依據(jù)2009年歐洲抗風濕病聯(lián)盟制定的干燥綜合征疾病活動度指數(shù)(ESSDAI)對患者疾病活動度進行評估。
　　5、采用SP

6、SS17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料符合正態(tài)分布的結(jié)果以均數(shù)±標準差(xˉ±SD)表示，兩組間比較應(yīng)用t檢驗；多組樣本間均數(shù)比較采用單因素方差分析。非正態(tài)分布的資料采用中位數(shù)(四分位間距)［M(P25,P75)］，兩組資料比較采用非參數(shù)Mann-WhitneyU檢驗。符合正態(tài)、方差齊的計量資料采用Pearson相關(guān)分析，非正態(tài)或方差不齊的計量資料采用Spearman相關(guān)分析。
　　結(jié)果：
　　1、pSS患者外周血中CD

7、19+CD5+CD1dhiBreg及APRIL的表達水平：pSS患者外周血中CD19+CD5+CD1dhiBreg占CD19+細胞百分比為5.06±0.69％，較健康對照組2.55±0.54%顯著升高(P<0.001)。血清APRIL的表達水平為7.40±2.20ng/ml，較健康對照組1.99±0.44ng/ml顯著升高(P<0.001)。
　　2、pSS患者外周血CD19+CD5+CD1dhiBreg表達和APRIL水平與自身

8、抗體的關(guān)系：按照自身抗體的存在與否，將pSS患者分為ANA陰性組(7例)、陽性組(23例)；抗SSA陰性組(11例)、陽性組(19例)；抗SSB陰性組(20例)、陽性組(10例)；RF陰性組(19例)、陽性組(11例)?？筍SA抗體陽性、抗SSB抗體陽性組pSS患者外周血CD19+CD5+CD1dhiBreg表達分別為5.44±0.46%和5.59±0.53%，顯著高于對應(yīng)抗體陰性患者的4.41±0.49%和4.79±0.61%(t=-

9、5.70,-3.53;P<0.001)。上述其余各抗體陽性組和陰性組pSS患者外周血CD19+CD5+CD1dhiBreg表達差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。pSS患者血清APRIL在各抗體陽性組和陰性組的表達差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　3、pSS患者外周血CD19+CD5+CD1dhiBreg表達和APRIL水平與臨床指標的關(guān)系：pSS患者外周血中CD19+CD5+CD1dhiBreg表達與年齡呈負相關(guān)(r=-0

10、.43;P<0.05)，與IgG呈正相關(guān)(r=0.44;P<0.05)；血清中APRIL的表達與ESR成正相關(guān)(r=0.91;P<0.05)。
　　4、pSS患者外周血CD19+CD5+CD1dhiBreg表達和APRIL水平與唇腺病理分級的關(guān)系：實驗組pSS患者唇腺病理等級為3級的有8例，唇腺病理等級為4級的有22例，兩組CD19+CD5+CD1dhiBreg的表達分別為4.84±0.69%和5.14±0.68%，二者間差異無統(tǒng)

11、計學意義(t=-1.07;P＞0.05)；APRIL的表達分別為6.90±1.84ng/ml和7.59±2.34ng/ml，二者間差異亦無統(tǒng)計學意義(t=-0.75;P＞0.05)。
　　5、pSS患者外周血CD19+CD5+CD1dhiBreg表達和APRIL水平與ESSDAI的關(guān)系：按ESSDAI評分將疾病活動度分為4個等級。0-2分為1級，3-5分為2級，6-8分為3級，9分以上為4級。實驗組pSS患者ESSDAI評分分布1

12、級6例，2級19例，3級5例，其CD19+CD5+CD1dhiBreg的表達分別為4.95±0.78%，5.09±0.68%和5.08±0.76%。APRIL的表達水平分別為8.73±3.11ng/ml，6.76±1.69ng/ml和8.27±2.17ng/ml；在疾病活動度不同分級之間CD19+CD5+CD1dhiBreg及APRIL的表達差異均無統(tǒng)計學意義(F=0.10,0.93;P＞0.05)。
　　6、pSS患者外周血CD

13、19+CD5+CD1dhiBreg表達和血清APRIL水平的相關(guān)性：pSS患者外周血中CD19+CD5+CD1dhiBreg與APRIL的表達不具有相關(guān)性(r=-0.04;P>0.05)。
　　結(jié)論：
　　1、pSS患者外周血中CD19+CD5+CD1dhiBreg及APRIL的表達均較健康對照組顯著升高，提示CD19+CD5+CD1dhiBreg及血清APRIL參與了pSS的發(fā)病過程。
　　2、抗SSA抗體陽性和抗S