TLR2和HMGB1在原發(fā)性干燥綜合征患者外周血中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：原發(fā)性干燥綜合征（primary Sj?gren’s syndrome，pSS）是由于免疫功能紊亂所導(dǎo)致的外分泌腺損傷性疾病，臨床上以口眼干燥為主要表現(xiàn)，病理上以外分泌腺高度淋巴細(xì)胞浸潤為特征。本病好發(fā)于女性，是一種常見的自身免疫性疾病，在我國人群的患病率為0.3％～0.7%。pSS是一種異質(zhì)性疾病，臨床上可表現(xiàn)為輕微的口眼干燥性癥狀、關(guān)節(jié)痛到全身多系統(tǒng)受累癥狀，如肺間質(zhì)纖維化、周圍神經(jīng)病變等，可合并發(fā)熱。早期癥狀不典型，因此容易

2、被誤診誤治。pSS病因及發(fā)病機(jī)制尚未明確，目前認(rèn)為與遺傳、感染、免疫功能紊亂等多種因素相關(guān)。研究證實，本病系自身免疫因素介導(dǎo)的慢性炎癥反應(yīng)的結(jié)果，免疫功能紊亂貫穿了pSS發(fā)生、發(fā)展的全過程。新近發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞因子高遷移率族蛋白1(HMGBl)是一種具有雙重作用的預(yù)警素。Toll樣受體2（TLR2）隸屬于Toll樣受體家族，存在于固有免疫細(xì)胞表面，是聯(lián)系先天性免疫和獲得性免疫的紐帶。本研究通過檢測pSS患者外周血中HMGB1及TLR2的表達(dá)，

3、并通過分析二者與pSS臨床、實驗室指標(biāo)的相關(guān)性，探討HMGB1和TLR2在pSS發(fā)病發(fā)展中的作用。
　　方法：⑴選取河北省人民醫(yī)院風(fēng)濕免疫科2015年1月至2015年12月門診及住院部pSS初治患者43例為實驗組（pSS組），均符合2002年修訂的干燥綜合征國際分類標(biāo)準(zhǔn)，選取20例健康志愿者作為對照組，所有入組人群均未合并腫瘤和感染性疾病。⑵采用流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測 pSS組及對照組外周血單核細(xì)胞表面TLR2的表達(dá)。采用酶聯(lián)免

4、疫吸附試驗（ELISA）檢測pSS組及對照組血清中HMGB1水平。⑶記錄pSS患者的臨床癥狀和體征，并檢測其自身抗體（ANA、RF、抗SSA抗體、抗SSB抗體）的表達(dá)及免疫球蛋白（IgG）、補(bǔ)體(C3、C4)、C-反應(yīng)蛋白(CRP)、血沉(ESR)水平。⑷唇腺病理分級：取 pSS患者下唇的小唾液腺活組織后進(jìn)行固定、包埋、切片、染色等，并按照Chisholm標(biāo)準(zhǔn)將淋巴細(xì)胞浸潤程度分為0-Ⅳ級。⑸pSS疾病活動度的評估：依據(jù)2009年歐洲抗

5、風(fēng)濕病聯(lián)盟(EULAR)制定的SS病情評估指數(shù)ESSDAI，評估pSS患者的疾病活動指數(shù)。⑹所有數(shù)據(jù)輸入SPSSl3.0統(tǒng)計軟件,進(jìn)行統(tǒng)計分析。
　　結(jié)果：①pSS患者外周血單核細(xì)胞表面TLR2及血清中HMGB1的表達(dá)：pSS組外周血單核細(xì)胞表面 TLR2陽性表達(dá)率（80.33±7.27）%，顯著高于對照組（68.27±16.68）%， P=0.006。pSS組血清中 HMGB1表達(dá)水平（59.17±15.70）ng/ml，顯著高

6、于對照組（27.89±19.83）ng/ml，P＜0．001。②pSS患者HMGB1/TLR2的表達(dá)與系統(tǒng)損害的關(guān)系：根據(jù)是否合并系統(tǒng)損害將 pSS組分為兩組，系統(tǒng)損害組定義為除去口干眼干癥狀外，血液系統(tǒng)、周圍神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)等任一系統(tǒng)受累者，非系統(tǒng)損害組定義為單純口干眼干癥狀者。系統(tǒng)損害組和非系統(tǒng)損害組血清HMGB1表達(dá)水平分別為（57.99±14.89）ng/ml、（60.53±16.87） ng/ml，兩組之

7、間比較無統(tǒng)計學(xué)差異，P=0.603。系統(tǒng)損害組和非系統(tǒng)損害組外周血單核細(xì)胞表面 TLR2陽性表達(dá)率分別為（81.06±7.48）%、（79.31±7.17）%，兩組之間比較無統(tǒng)計學(xué)差異，P=0.533。③pSS患者HMGB1/TLR2的表達(dá)與自身抗體表達(dá)的關(guān)系：分別比較ANA、RF、抗SSA抗體、抗SSB抗體陽性和陰性pSS患者HMGB1和TLR2的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)RF陽性組HMGB1的表達(dá)水平（67.11±13.46）ng/ml，高于 RF

8、陰性組（55.34±15.46）ng/ml，P=0.019；HMGB1的表達(dá)水平在ANA、抗SSA抗體及抗SSB抗體的陽性組和陰性組之間無明顯差異，P均＞0.05。RF陽性組TLR2的陽性表達(dá)率（86.25±3.24）%，顯著高于RF陰性組（78.79±7.28）%，P=0.001；抗SSA抗體陽性組TLR2的陽性表達(dá)率（82.57±6.58）%，顯著高于抗SSA抗體陰性組（74.46±5.78）%，P=0.005；TLR2的陽性表達(dá)率

9、在ANA及抗SSB抗體的陽性組和陰性組之間無明顯差異，P均＞0.05。④pSS患者 HMGB1/TLR2的表達(dá)與相關(guān)實驗室指標(biāo)的相關(guān)性：pSS患者血清HMGB1表達(dá)水平與IgG、補(bǔ)體C3、C4、ESR、CRP水平無相關(guān)性，r=0.190，-0.017，0.081，0.141，0.019，P均>0.05。pSS患者外周血單核細(xì)胞表面TLR2陽性表達(dá)率與IgG水平呈正相關(guān)，r=0.577，P=0.001；與補(bǔ)體C3、C4、ESR、CRP水平

10、無相關(guān)性，r=0.058，0.113，0.270，0.306， P均>0.05。⑤pSS患者HMGB1/TLR2的表達(dá)與唇腺病理分級的關(guān)系：pSS患者唇腺病理Ⅲ級組、Ⅳ級組血清 HMGB1表達(dá)水平分別為（52.68±8.46） ng/ml、（60.25±17.72）ng/ml，兩組之間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，P=0.317。pSS患者唇腺病理Ⅲ級組、Ⅳ級組外周血單核細(xì)胞表面TLR2陽性表達(dá)率分別為（75.35±2.46）%、（79.13±

11、6.81）%，兩組之間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，P=0.077。⑥pSS患者HMGB1/TLR2的表達(dá)與疾病活動指數(shù)ESSDAI的相關(guān)性：pSS患者血清HMGB1表達(dá)水平與ESSDAI無相關(guān)性，r=0.044，P＞0.05。pSS患者外周血單核細(xì)胞表面 TLR2陽性表達(dá)率與 ESSDAI呈正相關(guān)，r=0.621，P＜0.001。⑦pSS患者 HMGB1表達(dá)與 TLR2表達(dá)的相關(guān)性：pSS患者血清HMGB1表達(dá)水平與外周血單核細(xì)胞表面 TLR

12、2陽性表達(dá)率無相關(guān)性， r=0.087，P＞0.05。
　　結(jié)論：⑴pSS患者HMGB1/TLR2的表達(dá)水平較對照組明顯升高，兩組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，表明血清HMGB1和外周血單核細(xì)胞表面TLR2均參與了pSS的發(fā)病過程，有可能是通過HMGB1-TLR2信號途徑介導(dǎo)pSS的發(fā)病。⑵pSS患者HMGB1/TLR2在RF陽性組的表達(dá)高于RF陰性組，TLR2在抗SSA抗體陽性組的表達(dá)高于抗SSA抗體陰性組，提示HMGB1/TLR2在