p-STAT3-SOCS1蛋白在原發(fā)性干燥綜合征患者唇腺組織中的表達及意義.pdf

1、干燥綜合征（Sjogren’s syndrome，SS）是一種較為常見的自身免疫性疾病，主要侵犯外分泌腺，尤以淚腺和唾液腺受累為主。以口干、眼干為主要臨床表現(xiàn)，但亦可出現(xiàn)多系統(tǒng)功能損害，嚴(yán)重者可危及患者生命。但其發(fā)病機制尚不清楚。目前認(rèn)為T、B淋巴細(xì)胞的異?；罨l(fā)揮著重要作用。已有研究顯示，用決定Tfh細(xì)胞功能的細(xì)胞因子IL-21刺激系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血淋巴細(xì)胞后，其p-STAT3和SOCS1的表達水平隨之發(fā)生變化。也有研究顯示，在

2、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎大鼠的滑膜中p-STAT3的表達水平是升高的。說明p-STAT3在自身免疫性疾病中發(fā)揮作用，且p-STAT3參與的CIS的表達對SOCS1的表達是極其重要的。p-STAT3和SOCS1二者在唇腺組織T淋巴細(xì)胞活化以及唇腺上皮細(xì)胞凋亡中的作用尚少有研究報道。
　　目的：
　　本研究通過收集臨床確診為原發(fā)性干燥綜合征患者唇腺組織，采用免疫熒光法和Western Blot方法分別檢測不同病理等級唇腺組織中的p-STAT

3、3、SOCS1的表達水平，比較Ⅰ、Ⅱ級和Ⅲ、Ⅳ級組中兩種蛋白的表達差異，再進一步觀察病理改變?yōu)棰蠹壗M和Ⅳ級組之間這兩種蛋白表達的差異，并探討其與CD4+T細(xì)胞的關(guān)系，用以證實p-STAT3/SOCS1信號通路是否通過誘導(dǎo)T細(xì)胞的活化對干燥綜合征的發(fā)病及疾病發(fā)展產(chǎn)生影響，旨在為未來干燥綜合征的治療提供新的干預(yù)靶點。
　　方法：
　　1首先應(yīng)用單標(biāo)免疫熒光和Western blot法分別檢測Ⅲ、Ⅳ級組和Ⅰ、Ⅱ級組唇腺組織中p-S

4、TAT3、SOCS1陽性細(xì)胞表達率和蛋白相對表達量。再應(yīng)用雙標(biāo)免疫熒光檢測Ⅲ、Ⅳ級組和Ⅰ、Ⅱ級組唇腺組織中CD4+T細(xì)胞的表達中p-STAT3、SOCS1的表達位置并計數(shù)陽性患者個體數(shù)。
　　2統(tǒng)計學(xué)處理：采用SPSS21.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，Ⅲ、Ⅳ級組與Ⅰ、Ⅱ級組中的陽性個體數(shù)的比較采用Fisher確切概率法進行檢驗，以P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。Ⅲ級組、Ⅳ級組之間淋巴細(xì)胞灶中的陽性細(xì)胞率的差異的比較采用秩和檢驗，以P<0

5、.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1免疫熒光單標(biāo)檢測p-STAT3、SOCS1在唇腺組織中的表達
　　免疫熒光法單標(biāo)結(jié)果顯示，干燥綜合征Ⅲ、Ⅳ級組唇腺組織淋巴細(xì)胞灶中可見較多的p-STAT3綠色熒光顆粒，而Ⅰ、Ⅱ級組僅有極少量的綠色熒光顆粒表達。同時，Ⅲ、Ⅳ級組唇腺組織淋巴細(xì)胞灶中也可見較多的SOCS1綠色熒光顆粒，而Ⅰ、Ⅱ級組僅有極少量的綠色熒光顆粒表達。另外，發(fā)現(xiàn)在唇腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞中也可見有p-STAT3、S

6、OCS1的綠色熒光表達。
　　2 Western blot檢測p-STAT3、SOCS1在唇腺組織中的表達
　　Western blot分析顯示，與Ⅰ、Ⅱ級組（0.083±0.063）相比，Ⅲ、Ⅳ級組唇腺組織中p-STAT3蛋白表達水平升高，且Ⅳ級唇腺組織中p-STAT3的表達量（2.777±0.117）高于Ⅲ級病變組織（1.089±0.001），經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析兩組之間的的表達有明顯差異（P＜0.05）。同時，SOCS1蛋白的

7、表達水平也高于Ⅰ、Ⅱ級組（0.033±0.002），Ⅳ級病變組織（1.233±0.051）的表達量高于Ⅲ級病變組織（0.506±0.011），經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析兩組之間的的表達有明顯差異（P＜0.05）。
　　3免疫熒光單標(biāo)檢測CD4+T細(xì)胞在唇腺組織中的表達
　　免疫熒光法單標(biāo)結(jié)果顯示，在干燥綜合征Ⅲ、Ⅳ級組唇腺組織淋巴細(xì)胞灶中可見大量CD4+紅色熒光顆粒，而在Ⅰ、Ⅱ級組唇腺組織中極少有該紅色熒光顆粒的表達。
　　4免疫熒

8、光雙標(biāo)檢測CD4+T細(xì)胞中p-STAT3、SOCS1的表達
　　CD4/p-STAT3雙標(biāo)免疫熒光結(jié)果顯示，在干燥綜合征Ⅲ、Ⅳ級組唇腺組織淋巴細(xì)胞灶中CD4+T淋巴細(xì)胞中可見p-STAT3的表達，且Ⅳ級患者病變組織中的CD4+p-STAT3+T淋巴細(xì)胞的陽性率高于Ⅲ級組，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析兩組之間的的表達無明顯差異（Z=-0.645，P=0.519）。CD4/SOCS1雙標(biāo)免疫熒光結(jié)果顯示，在干燥綜合征Ⅲ、Ⅳ級組唇腺組織淋巴細(xì)胞灶中CD