TCP-1、MAML2在成人原發(fā)性腎病綜合征患者外周血單個核細(xì)胞中表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:初步觀察成人原發(fā)性腎病綜合征(PNS)患者外周血單個核細(xì)胞(PBMC)中t-復(fù)合多肽1(TCP-1)、MAML2基因mRNA的表達(dá)與PNS發(fā)病的關(guān)系及其與糖皮質(zhì)激素抵抗的關(guān)系,為進(jìn)一步探討TCP-1、MAML2參與PNS發(fā)病機(jī)制及糖皮質(zhì)激素抵抗機(jī)制提供部分實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:(1)采用隨機(jī)病例-對照研究,對照組(A組):健康個體30例；病例組(B組):初診PNS患者75例(根據(jù)患者對GC反應(yīng)性分B1、B2兩個亞組:B1

2、組為GC敏感患者38例,B2組為GC抵抗患者31例,失訪6例),均于清晨抗凝管采集新鮮外周靜脈血5ml,經(jīng)聚蔗糖-泛影葡胺(Ficoll-Hypaque)密度梯度離心法分離PBMC。(2)采用反轉(zhuǎn)錄酶.聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)擴(kuò)增每例標(biāo)本PBMC中TCP-1、MAML2基因的mRNA,2％瓊脂糖凝膠電泳檢驗(yàn)PCR產(chǎn)物,用定量分析軟件Quantity One檢測凝膠電泳條帶的光密度值,以人的GAPDH為內(nèi)參,計(jì)算TCP-1、MAML2

3、基因mRNA的相對表達(dá)值。(3)回收凝膠目的條帶送測序,在基因庫(Genbank)中通過BLAST軟件與已知的TCP-1、MAML2基因序列進(jìn)行同源性比較,驗(yàn)證目的片段,排除假陽性。
　　 結(jié)果:(1)各標(biāo)本RNA樣品質(zhì)量:RNA純度:OD260／280:1.8～2.0；RNA濃度:36.8～68.71ng／μl。RNA完整性:總RNA的28S和18S條帶清晰,5S條帶模糊；28S:18S>1,含量比例正常,5S較少。(2)回收

4、凝膠電泳條帶測序:與Genebank中已知的TCP-1基因和MAML2基因序列進(jìn)行同源性比較均達(dá)99％。(3)TCP-1基因mRNA的表達(dá)結(jié)果:對照組(A組)的TCP-1基因mRNA表達(dá)強(qiáng),病例組(B組)較A組表達(dá)顯著減弱,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；而GC抵抗組(B2組)的TCP-1基因mRNA較GC敏感組(B1組)表達(dá)顯著增強(qiáng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。(4)MAML2基因mRNA的表達(dá)結(jié)果:對照組(A組)、病例組(B

5、組)的陽性表達(dá)率分別是70％和64％,表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；GC敏感組(B1組)、GC抵抗組(B2組)的陽性表達(dá)率分別是89.47％和29.03％。B1組表達(dá)明顯高于B2組,A組介于B1組、B2組之間,表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　 結(jié)論:(1)在PNS患者中TCP-1基因mRNA表達(dá)較正常對照組減弱,提示TCP-1通過使其mRNA表達(dá)減弱,可能參與了PNS的發(fā)病。(2)TCP-1基因mRNA在PN