轉(zhuǎn)錄因子Bcl-6-Blimp-1在原發(fā)性干燥綜合征中的致病作用.pdf

1、Bcl-6(B cell lymphoma6)屬于抗細(xì)胞凋亡的原癌基因，表達(dá)于T、B淋巴細(xì)胞中。當(dāng)T、B細(xì)胞受到抗原及細(xì)胞因子刺激后，促進(jìn)Bcl-6的表達(dá)，從而加快T、B細(xì)胞有絲分裂，遷移至淋巴細(xì)胞的中心濾泡區(qū)域，形成生發(fā)中心。Bcl-6是生發(fā)中心形成的重要信號(hào)，缺乏該信號(hào)會(huì)導(dǎo)致輔助性T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞分化嚴(yán)重受損，無法形成生發(fā)中心。轉(zhuǎn)錄因子Blimp-1(B lymphocyte induced maturation protei

2、n1,Blimp-1)與Bcl-6是一對(duì)相互拮抗的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，表達(dá)生理水平Blimp-1的CD4+T細(xì)胞向?yàn)V泡型輔助性T淋巴細(xì)胞(Follicular helper T lymphocytes，Tfh)分化受到抑制。
　　目前普遍認(rèn)為，在原發(fā)性干燥綜合征的發(fā)生發(fā)展過程中，T、B淋巴細(xì)胞過度活化參與了外分泌腺灶性淋巴細(xì)胞（生發(fā)中心）的形成，引起唾液腺、淚腺分泌功能降低，引起口干、眼干等癥狀。另一方面T、B細(xì)胞過度活化導(dǎo)致多種自身抗

3、體產(chǎn)生，引起的全身性多器官免疫性損傷。緣于Bcl-6誘導(dǎo)、維持生發(fā)中心形成，從而推測(cè)可能參與了原發(fā)性干燥綜合征的免疫紊亂和免疫損傷，本文擬檢測(cè)原發(fā)性干燥綜合征患者Bcl-6/Blimp-1蛋白的異常表達(dá)及分析其臨床意義。
　　目的:檢測(cè)原發(fā)性干燥綜合征患者唇腺組織中淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)程度，同時(shí)檢測(cè)Bcl-6/Blimp-1蛋白在T、B淋巴細(xì)胞中的表達(dá)情況，并探討其與淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)程度的線性關(guān)系、與臟器受累的關(guān)系及與實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)之間的相關(guān)性，

4、進(jìn)一步分析其在原發(fā)性干燥綜合征中的致病作用，探討B(tài)cl-6/Blimp-1蛋白在原發(fā)性干燥綜合征發(fā)生、發(fā)展中的生物學(xué)作用。
　　方法:選擇2012年3月至2013年12月在河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院免疫風(fēng)濕科原發(fā)性干燥綜合征患者30例作為疾病組，其中包括繼發(fā)腎小管酸中毒患者2例，血液系統(tǒng)受損患者8例，周圍神經(jīng)病變患者2例，肺間質(zhì)纖維化患者5例，無系統(tǒng)損害的患者13例。所有患者在唇腺活檢術(shù)前未經(jīng)激素及免疫抑制劑治療。另選擇口腔外科黏液腺囊

5、腫、下唇外傷等非自身免疫性疾病患者11例作為對(duì)照組。所有研究對(duì)象唇腺組織標(biāo)本均由10％中性甲醛固定，石蠟包埋，HE染色，免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)所有標(biāo)本中Bcl-6、Blimp-1蛋白的表達(dá)，顯微鏡下觀察兩組間Bcl-6、Blimp-1蛋白的表達(dá)、定位及與淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞浸潤(rùn)、生發(fā)中心形成的關(guān)系。在組織切片中，計(jì)數(shù)5個(gè)高倍鏡視野中的陽性細(xì)胞數(shù)目，并據(jù)陽性細(xì)胞數(shù)比例＜1％，1％-25％，26％-50％，51％-75％，＞75％分別計(jì)為0分，1

6、分，2分，3分，4分;根據(jù)染色強(qiáng)度分為染色強(qiáng)度弱、中、強(qiáng)三個(gè)等級(jí)，分別記為1分，2分，3分，陽性細(xì)胞數(shù)目比例評(píng)分×染色強(qiáng)度評(píng)分為每例標(biāo)本最后綜合計(jì)分，綜合記分≥1為表達(dá)陽性，＜1則為陰性。根據(jù)Chisholm唇腺病理分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，將所有標(biāo)本分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ4個(gè)等級(jí)，分別代表少量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)、中等量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)、一個(gè)淋巴細(xì)胞灶浸潤(rùn)、多個(gè)淋巴細(xì)胞灶浸潤(rùn)。采用SPSS13.0(SPSS Company, Chicago，Illinois，USA

7、)版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，兩組間比較采用兩組獨(dú)立樣本比較的秩和檢驗(yàn);多組間Bcl-6、Blimp-1蛋白表達(dá)的比較采用多組獨(dú)立樣本比較的秩和檢驗(yàn)，兩等級(jí)資料間相關(guān)性分析采用spearman相關(guān)系數(shù)。統(tǒng)計(jì)描述采用中位數(shù)(medican，M)、上四分位(interquartile up，QU)、下四分位（interquartile loW, QL）。以檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1光鏡下觀

8、察，正常對(duì)照組唇腺組織腺泡大小均勻，導(dǎo)管排列整齊，無擴(kuò)張，間質(zhì)無或少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn);疾病組腺泡大小不等，部分腺體萎縮，以導(dǎo)管周圍為明顯，間質(zhì)有1個(gè)或多個(gè)灶性淋巴細(xì)胞浸潤(rùn);
　　2疾病組與對(duì)照組Bcl-6蛋白表達(dá)水平評(píng)分分別為3.0(2.0，4.0)、0.0(0.0，1.0)分，二者差異的比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(z=4.670，P＜0.001);疾病組組織切片中導(dǎo)管細(xì)胞及其周圍淋巴細(xì)胞均可檢測(cè)到Bcl-6蛋白的表達(dá)，腺泡細(xì)胞偶可檢測(cè)到陽性

9、細(xì)胞。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析Bcl-6蛋白表達(dá)與導(dǎo)管周圍淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)程度呈顯著正相關(guān)（rs=0.644，p＜0.001），說明Bcl-6蛋白與淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)程度有關(guān)。
　　3疾病組與對(duì)照組Blimp-1蛋白表達(dá)水平評(píng)分分別為3.0(2.0，4.0)、1.0(0.0，1.0)分，二者差異的比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(z=4.606，P＜0.001);疾病組組織切片中導(dǎo)管細(xì)胞及其周圍淋巴細(xì)胞均可檢測(cè)到Blimp-1蛋白的表達(dá)，腺泡細(xì)胞偶可檢測(cè)到陽性細(xì)胞。經(jīng)

10、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析Blimp-1蛋白表達(dá)與導(dǎo)管周圍淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)程度呈顯著正相關(guān)(rs=0.637，p＜0.001)，說明Blimp-1蛋白與淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)程度有關(guān)。
　　4疾病組中，臨床系統(tǒng)受累中的比較:腎小管酸中毒組、血液系統(tǒng)受累組、周圍神經(jīng)病變組、肺間質(zhì)纖維化組及無系統(tǒng)損害組PSS患者Bcl-6蛋白的表達(dá)水平評(píng)分分別為3.5（1.0*，6.0*）、3.0(2.0，3.0)、4.5（3.0*，6.0*）、4.0(2.5，4.0)、3.0(

11、2.5，4.0)分，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=4.436，P=0.350);五組Blimp-1蛋白的表達(dá)水平評(píng)分分別為2.5（1.0*，4.0*）、3.0(2.0，4.0)、3.0（2.0*，4.0*）、4.0(3.0，6.0)、2.0(2.0，4.0)分，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=4.898，P=0.298）;
　　5疾病組中，實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的比較:免疫球蛋白(IgG)升高組、正常組Bcl-6蛋白表達(dá)水平評(píng)分

12、分別為3.0(3.0，4.0)、3.0(2.0，3.0)分，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(z=1.126，P=0.260);IgG升高組、正常組，Blimp-1蛋白表達(dá)水平評(píng)分分別為4.0(2.0，4.0)、2.0(2.0，4.0)分，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(z=1.454，P=0.146);經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，在β2微球蛋白升高組和正常組，Bcl-6/Blimp-1蛋白的表達(dá)水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　6相關(guān)性分析顯示，疾病組淋