環(huán)境影響因子及抑菌劑對(duì)李斯特氏菌生長(zhǎng)的影響.pdf

1、李斯特氏菌是常見的食源性致病菌，在自然界中廣泛存在，如水、土壤、植物等?？稍谑称飞a(chǎn)貯藏過程中導(dǎo)致感染和腐敗變質(zhì)，造成污染，并引起食物中毒和其他食源性疾病，影響人類健康。曾有報(bào)道被污染的食品包括奶及奶制品、肉制品包括豬肉、牛肉、羊肉、腌臘食品、水產(chǎn)品、新鮮蔬菜等植物性食品。目前李斯特氏菌感染已成為發(fā)展中國家和發(fā)達(dá)國家的首要食品安全問題，其中的單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌(簡(jiǎn)稱單增李斯特氏菌)曾被世界衛(wèi)生組織列為20世紀(jì)90年代四大食源性致病

2、菌之一，人類感染后可導(dǎo)致腦膜炎，孕婦流產(chǎn)，敗血癥，腸胃炎等。李斯特氏菌可在高鹽，低溫，干燥等極端環(huán)境下生存，因此可通過多種途徑進(jìn)行傳播。
　　 本文首先針對(duì)單增李斯特氏菌ATCC7644的生長(zhǎng)條件，應(yīng)用Design-Expert7.0軟件中的Box-Behnken設(shè)計(jì)，以pH、鹽度和溫度為響應(yīng)因子，以菌落對(duì)數(shù)值為響應(yīng)值建立了響應(yīng)曲面模型，獲得了單增李斯特氏菌ATCC7644的最優(yōu)生長(zhǎng)條件，并通過牛奶接種模擬實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了響應(yīng)面分析結(jié)

3、果的準(zhǔn)確性。接著討論了幾種不同李斯特氏菌在不同培養(yǎng)條件下菌株間繁殖速度的差異性，發(fā)現(xiàn)在同一培養(yǎng)條件下，英諾克氏李斯特氏菌在培養(yǎng)4小時(shí)后即可成為體系中的優(yōu)勢(shì)菌株；本文還討論了常見食品添加劑山梨酸和山梨酸鉀對(duì)不同李斯特氏菌株及幾種食品中常見菌株的防腐效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)山梨酸對(duì)李斯特氏菌的防腐效果一般，山梨酸鉀對(duì)革蘭氏陰性菌的防腐效果優(yōu)于革蘭氏陽性菌。本研究的主要結(jié)果如下所示：
　　 1.食品中李斯特氏菌株的分離與鑒定
　　 從1

4、20份三種上海市常見食品中分離得到了16株李斯特氏菌，檢出率為13.33％。其中三文魚的檢出率為12.5％，蛤蜊為7.5％，咸肉為20％。經(jīng)革蘭氏染色，動(dòng)力實(shí)驗(yàn)，糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)和溶血實(shí)驗(yàn)鑒定，所分離所得菌株均為英諾克氏李斯特氏菌。
　　 2.響應(yīng)面法優(yōu)化單增李斯特氏菌ATCC7644的最佳生長(zhǎng)條件
　　 根據(jù)不同pH、鹽度和溫度條件下單增李斯特氏菌ATCC7644的生長(zhǎng)曲線，利用Design-Expert7.0軟件中的Box

5、-Behnken設(shè)計(jì)，建立了以菌落對(duì)數(shù)值(logCFU/mL)為響應(yīng)值的多元二次方程。響應(yīng)面分析結(jié)果顯示單增李斯特氏菌的最優(yōu)生長(zhǎng)條件：pH8.0，鹽度為培養(yǎng)基本底鹽度0.5％，溫度為35.06℃。此外，在pH、鹽度和溫度3個(gè)影響因素中，pH對(duì)ATCC7644生長(zhǎng)的影響最為顯著(P<0.0001)，其次是鹽度和溫度。牛奶接種單增李斯特氏菌(ATCC7644和19115)和英諾克李斯特分離菌株的模擬實(shí)驗(yàn)結(jié)果驗(yàn)證了響應(yīng)面分析的準(zhǔn)確性。

6、　　 3.不同生長(zhǎng)條件下李斯特屬不同菌種間繁殖速度的差異性研究
　　 4株李斯特氏菌在5種不同液體培養(yǎng)基(TSB-YE，BHI，BLEB，LB，TSB)中的生長(zhǎng)曲線顯示英諾克李斯特氏菌(ATCC33090)的繁殖速度快于單增李斯特氏菌(ATCC19114，19115和13932)，此差異性在培養(yǎng)4小時(shí)后更為顯著。英諾克李斯特氏菌和單增李斯特氏菌的混合培養(yǎng)模擬體系顯示混合菌體系中單增李斯特氏菌的生長(zhǎng)易受到英諾克李斯特氏菌的抑制，

7、此結(jié)果對(duì)如何降低食品中單增李斯特氏菌的漏檢率具有重要意義。
　　 4.單增李斯特氏菌與其他常見食源性致病菌對(duì)山梨酸鉀的耐受差異性探討
　　 以食品中單增李斯特氏菌和2種常見的革蘭氏陽性菌(蠟樣芽孢桿菌，金黃色葡萄球菌)與革蘭氏陰性菌(沙門氏菌、副溶血弧菌、熒光假單胞菌)為研究對(duì)象，針對(duì)純培養(yǎng)狀態(tài)和模擬食品體系進(jìn)行了研究。結(jié)果顯示1g/L山梨酸鉀對(duì)革蘭氏陰性菌的抑菌效果比單增李斯特氏菌等革蘭氏陽性菌要高2倍以上。最小抑菌濃

8、度實(shí)驗(yàn)和即食海帶的接種模擬實(shí)驗(yàn)結(jié)果與純培養(yǎng)體系的結(jié)果相吻合，說明單增李斯特氏菌等革蘭氏陽性菌對(duì)山梨酸鉀的耐受性強(qiáng)于革蘭氏陰性菌。
　　 5.食品添加劑山梨酸對(duì)李斯特氏菌的抑制作用
　　 選擇了3株ATCC菌株和3株食品中來源的菌株，分別在純培養(yǎng)狀態(tài)，模擬接種鱈魚和模擬接種豬肉狀態(tài)下進(jìn)行了研究，并進(jìn)行了最小抑菌濃度實(shí)驗(yàn)。研究發(fā)現(xiàn)山梨酸對(duì)李斯特氏菌的抑制作用有限，生長(zhǎng)平臺(tái)期時(shí)，純培養(yǎng)狀態(tài)下的抑制率為10％左右，模擬接種狀態(tài)下

9、的抑制率為5％左右；抑菌實(shí)驗(yàn)和MIC實(shí)驗(yàn)結(jié)果均顯示，分離型的英諾克李斯特氏菌(分離自食品)對(duì)山梨酸的耐受性好于單增李斯特氏菌(ATCC19115和13932)。
　　 本文研究結(jié)果顯示單增李斯特氏菌在低溫(0-7℃)條件下基本不生長(zhǎng)，高鹽(5-7％)體系中雖然繁殖速度受到抑制，但是可緩慢生長(zhǎng)；當(dāng)溫度()25℃后其繁殖速度出現(xiàn)顯著性增加，而目前食品中常用的防腐劑山梨酸鉀和山梨酸對(duì)李斯特氏菌的抑制效果一般，因此，食品生產(chǎn)后，在運(yùn)輸、

10、流通和銷售過程中的溫度控制非常重要，低溫有利于單增李斯特氏菌的控制。此外，英諾克李斯特氏菌在培養(yǎng)過程中很容易成為優(yōu)勢(shì)菌株，因此，在檢測(cè)和分離鑒定食品中單增李斯特氏菌時(shí)建議先選擇在李斯特氏菌繁殖速度差異性較小的生長(zhǎng)條件下進(jìn)行預(yù)增菌，如先在LB或TSB培養(yǎng)基下培養(yǎng)4小時(shí)，然后轉(zhuǎn)移到選擇性培養(yǎng)基中進(jìn)行分離檢測(cè)，這樣處理有利于減少單增李斯特氏菌的漏檢率。綜上所述，本文研究可為食品企業(yè)和監(jiān)管部門對(duì)李斯特氏菌的分離、檢測(cè)和控制提供理論依據(jù)，對(duì)單增李