納米磁珠對單增李斯特菌低場磁共振檢測的影響研究.pdf

1、食源性疾病是指通過攝食而進入人體的有毒有害物質(zhì)（包括生物性病原體）等致病因子所造成的疾病。一般可分為感染性和中毒性。近年來，食源性疾患的發(fā)病率居各類疾病總發(fā)病率的前列，是當前世界上最突出的衛(wèi)生問題。
　　近年來，隨著磁性納米技術(shù)的不斷發(fā)展，磁性納米材料以其獨特的理化性質(zhì)，在各個領(lǐng)域都有著非常廣泛地應用，如定向載藥、生物分子的分離與富集、疾病的臨床治療與診斷、各種生物分子的檢測以及生物傳感器等方面。
　　單增李斯特菌（List

2、eria monocytogenes）是全世界普遍公認一種重要的人畜共患食源性致病菌，其廣泛存在于各種乳制品、蔬菜、肉類等食品中，特別是即食食品中，對人的健康安全造成了極大的威脅。人類受感染后可導致胃腸炎、敗血癥、腦膜炎、流產(chǎn)，尤其是孕婦、嬰兒、老年人及免疫力低下者更易感染。
　　本論文采用生物功能化磁性納米粒子與低場磁共振技術(shù)結(jié)合而建立了一種單增李斯特菌的快速檢測方法，探究不同納米材料的低場磁共振技術(shù)在單增李斯特菌快速檢測中的影

3、響。第一部分成功合成了生物功能化的磁性納米材料。首先通過高溫熱解法合成了油溶性Fe/Fe3O4和Fe3O4磁性納米粒子，F(xiàn)e/Fe3O4磁性納米粒子粒徑約為12.22nm，F(xiàn)e3O4磁性納米粒子粒徑約為11.29nm。其次利用反相微乳液法對磁性納米粒子進行表面修飾，制備出二氧化硅包裹，修飾氨基的Fe/Fe3O4和Fe3O4磁性納米粒子，修飾之后，納米粒子粒徑均一、生物相容性好。接著使用EDC·HCL和NHS活化已經(jīng)氨基功能化的Fe/Fe

4、3O4和Fe3O4，從而制備得到特異性免疫化的納米材料。第二部分探究了納米磁珠對單增李斯特菌低場磁共振檢測的影響。首先優(yōu)化單增李斯特菌的培養(yǎng)條件，單增李斯特菌在李斯特氏菌增菌肉湯中生長最迅速、旺盛。其次使用不同納米材料成功構(gòu)建了一種單增李斯特菌的快速、靈敏檢測方法，靶標菌可以與免疫功能化磁珠的抗體特異性結(jié)合，引起實驗體系中橫向弛豫時間(T2)的變化，NMR可以敏感的檢測到這一變化。接著研究不同納米材料在低場磁共振檢測方法的影響，不同納米

5、材料都對靶標菌(L.monocytogenes)有很強的特異性。經(jīng)比較實驗，生物功能化的Fe/Fe3O4納米粒子和Fe3O4納米粒子進行核磁共振實驗時最優(yōu)穩(wěn)定劑都為2％脫脂牛奶;反應時，F(xiàn)e/Fe3O4納米粒子的最優(yōu)濃度為0.16mg/mL，F(xiàn)e3O4納米粒子的反應最適濃度為0.2mg/mL; Fe/Fe3O4納米粒子的最佳孵育時間為30min，而Fe3O4納米粒子的最佳孵育時間為40min，前者所用時間稍短;不同的納米材料，快速檢測單

6、增李斯特菌的線性檢測范圍均為1～103CFU/mL，檢測范圍一致，表明檢測的靈敏度與納米材料本身并沒有很大關(guān)聯(lián)。不同的納米材料用于實際樣品的檢測均顯示該檢測方法可以應用于食品樣品的檢測并對于L.monocytogenes有很強的特異性。所以經(jīng)比較可知不同納米材料在低場磁共振技術(shù)快速檢測L.monocytogenes中效果相似，在各項實驗參數(shù)中并沒有很大差別。
　　本文構(gòu)建了一種特異性強的單增李斯特菌快速檢測方法，并且探究納米磁珠對