不同來源產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌株對(duì)不同環(huán)境因子的抗性研究.pdf

1、產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌(LM)是重要的人畜共患病原菌及毒力最強(qiáng)的食源性病原菌，LM的致病性與毒力基因密切相關(guān)，缺失毒力基因可以導(dǎo)致其致病性的消失或下降。而不同環(huán)境因子作用于 LM后是否影響其毒力基因表達(dá)，從而喪失其已有的毒力，不同來源分離株 LM對(duì)不同環(huán)境因子的耐受性是否相同等仍不清楚。本研究以食源性 LM標(biāo)準(zhǔn)株、綿羊腦炎 LM分離株(LM90)及青貯飼草分離株 LM(LM19)作為試驗(yàn)菌株，分別采用不同溫度、PH值、氯化鈉濃度、紫外線進(jìn)行

2、作用，通過檢測(cè)LM的生長(zhǎng)狀態(tài)、毒力因子、主要毒力基因的表達(dá)情況，以確定不同來源 LM分離株對(duì)不同環(huán)境因子的抗性，為進(jìn)一步探討 LM的保菌機(jī)制、維持致病力機(jī)制及食源性 LM傳播控制提供參考。主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下：
　　1、不同來源 LM對(duì)不同理化因子的抗性
　　采用不同溫度、pH、氯化鈉濃度、紫外線作用不同來源 LM，通過活菌計(jì)數(shù)和吸光度檢測(cè)觀察細(xì)菌生長(zhǎng)狀況。結(jié)果62℃30分鐘和72℃30分鐘三株 LM均生長(zhǎng)，其中食源性LM

3、對(duì)熱抗性最強(qiáng)、LM19最弱，100℃時(shí)三株 LM均不生長(zhǎng)，提示巴氏消毒方法對(duì)處理污染 LM的食品時(shí)存在安全隱患；低溫環(huán)境4℃/10d、4℃/20d、-20℃/10d和-20℃/20d下 LM仍存活，4℃較-20℃更利于 LM生長(zhǎng)，其中 LM19對(duì)低溫的抗性最強(qiáng)，LM90最弱，提示低溫冷藏和冷凍對(duì)受 LM污染的食品不影響 LM的生存活性；不同 PH及鹽濃度生長(zhǎng)試驗(yàn)顯示 Ph4-10時(shí)三株 LM均生長(zhǎng)良好，ph2-3活菌數(shù)很少，其中 LM1

4、9抗酸性最強(qiáng)，食源性 LM最弱，說明食品保存應(yīng)在保證不影響食品品質(zhì)的前提下盡可能選酸性條件保存，制備青貯時(shí)保持在 pH4以下，可控制青貯中 LM的生長(zhǎng)；在1-7％濃度鹽環(huán)境中三株 LM生長(zhǎng)良好，隨著鹽濃度增大，存活率逐漸下降，其中以 LM90的抗鹽性最強(qiáng)，在10%以上鹽濃度下三株 LM趨于不生長(zhǎng)，從而間接說明腌制食品受 LM污染的風(fēng)險(xiǎn)較??；在紫外線照射時(shí)間超過90min時(shí)才能完全殺滅 LM，其中以 LM19的抗性最強(qiáng)。因此，紫外線用于微

5、生物實(shí)驗(yàn)超凈工作臺(tái)消毒時(shí)，照射時(shí)間最好達(dá)到90min以上。
　　2、不同來源 LM受不同理化因子作用后其毒力因子變化
　　三株 LM受溫度為-20℃-72℃處理后均出現(xiàn)β溶血現(xiàn)象；pH2-10的環(huán)境下，三株 LM均出現(xiàn)β溶血圈；在1%-18%鹽濃度時(shí)三株 LM均出現(xiàn)明顯β溶血現(xiàn)象；不同時(shí)間紫外線照射后，食源性 LM和 LM90在0-90min均出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，LM19在0-60min出現(xiàn)了溶血圈。磷脂酶試驗(yàn)顯示，三株 LM在-

6、20℃-72℃溫度下、pH2-10及1%-18%鹽濃度時(shí)三株 LM周邊均出現(xiàn)乳白色暈圈現(xiàn)象，顯酶活性陽性反應(yīng)，且圈的大小無明顯差異；紫外線照射顯示食源性 LM和 LM90在0-90min時(shí)磷脂酶陽性，LM19在0-60min均為陽性。
　　3、不同來源 LM受不同理化因子作用后其毒力基因的變化
　　三株 LM除在100℃不生長(zhǎng)外，其余-20℃-72℃生長(zhǎng)的細(xì)菌均通過 PCR擴(kuò)增出 hly毒力基因目的片段(743bp)和 pr

7、fA毒力基因目的片段(715bp)；在 pH2-10生長(zhǎng)的細(xì)菌均通過 PCR擴(kuò)增出 hly和 prfA毒力基因目的片段；鹽濃度在1%-18%下生長(zhǎng)的細(xì)菌均通過PCR擴(kuò)增出 hly和 prfA毒力基因目的片段，紫外線照射后均通過 PCR檢測(cè)到 hly和 prfA毒力基因目的片段。
　　上述研究結(jié)果表明，不同來源 LM在不同理化因子作用后，其生長(zhǎng)存活性狀與其主要毒力因子溶血素和磷脂酶變化及毒力基因 Hly和毒力調(diào)控因子 PrfA的表達(dá)