單核細(xì)胞增生性李斯特菌牧場(chǎng)劃性抗體的制備研究.pdf

1、單核細(xì)胞增生性李斯特菌(Listeriamonocytogenes，簡(jiǎn)稱LM，單增李斯特菌)是一種重要的食源性致病菌，該菌廣泛地存在于環(huán)境中，傳染途徑繁多。近年來(lái)大規(guī)模的李斯特菌病頻頻爆發(fā)，引起世界各國(guó)的高度重視。目前國(guó)內(nèi)外食品中單增李斯特菌的常用檢測(cè)方法主要有傳統(tǒng)的微生物學(xué)檢測(cè)、分子生物學(xué)檢測(cè)和免疫學(xué)檢測(cè)。免疫學(xué)方法具有快速、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便、結(jié)果易于判斷等特點(diǎn)，但是抗體的特異性是限制免疫學(xué)檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn)確性的首要因素。因此，獲取針

2、對(duì)單增李斯特菌的高特異性抗體是建立快速有效的單增李斯特菌診斷方法的物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　 本文在單增李斯特菌的國(guó)標(biāo)分離方法和ISO分離標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，采用Fraser肉湯增菌液結(jié)合PALCAM選擇性培養(yǎng)基與PCR擴(kuò)增(或16SrDNA測(cè)序)方案，建立了一種單增李斯特菌的快速分離鑒定方法。該法可以在3-5d內(nèi)完成單增李斯特菌的分離與鑒定。本文所建立的方法不僅可用于一般實(shí)驗(yàn)室的單增李斯特菌分離純化工作，尤其適用于大量樣本中單增李斯特菌的分離

3、與鑒定。
　　 采用三種滅活方式(強(qiáng)酸性電解水滅活、加熱滅活、紫外滅活)處理單增李斯特菌來(lái)制備免疫抗原，并對(duì)其免疫原性進(jìn)行比較分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)紫外滅活細(xì)菌具有較好的免疫原性，電解水處理細(xì)菌效果最差，結(jié)合電鏡掃描圖片可知，可初步判定細(xì)菌表面的完整性與細(xì)菌的免疫原性有一定的關(guān)系，此結(jié)論可為后續(xù)菌體抗原的制備提供一定的參考價(jià)值。
　　 本研究采用紫外滅活的細(xì)菌菌體為免疫抗原，分別免疫BALB/c小鼠和新西蘭大白兔，從而制備單

4、克隆抗體和多克隆抗體。最終獲得1株特異性的雜交瘤細(xì)胞株和數(shù)十毫升多克隆抗體。雜交瘤細(xì)胞株分泌的抗體能夠特異性識(shí)別單增李斯特菌，與李斯特菌屬其他細(xì)菌有較弱交叉反應(yīng)。制備的多克隆抗體能夠特異性識(shí)別李斯特菌屬細(xì)菌。
　　 利用所得抗體制備免疫磁珠，從單增李斯特菌的快速富集和檢測(cè)兩個(gè)方面進(jìn)行了抗體的應(yīng)用可行性探討。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)本研究制備抗體具有應(yīng)用價(jià)值。
　　 本研究為單增李斯特菌免疫學(xué)檢測(cè)的開發(fā)奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)，對(duì)推動(dòng)單增李斯特