部分食品單核細(xì)胞增生性李斯特菌污染檢測(cè)及其PFGE分型.pdf

1、目的：1.參加英國(guó)食品檢驗(yàn)?zāi)芰υu(píng)價(jià)體系（FEPAS）活動(dòng)，促進(jìn)本實(shí)驗(yàn)室的管理水平和技術(shù)能力與國(guó)際接軌。2.檢測(cè)部分食品中單核細(xì)胞增生性李斯特菌的污染狀況。3.采用PFGE分型方法為建立貴州單核細(xì)胞增生性李斯特菌PFGE數(shù)據(jù)庫(kù)提供依據(jù)。
　　方法：1.參照 GB22429-2008《食品中沙門氏菌、腸出血性大腸埃希氏菌 O157及單核細(xì)胞增生李斯特氏菌的快速篩選檢驗(yàn)》、SN/T1870-2007《食品中致病菌檢測(cè)方法實(shí)時(shí)PCR法》、

2、AOAC Official Method993.09.2000《李斯特屬在乳制品，海產(chǎn)品和肉類中的DNA雜交探針檢測(cè)法》、GB4789.30-2010《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)單核細(xì)胞增生李斯特氏菌檢驗(yàn)》分別對(duì)FEPAS能力驗(yàn)證提供的二份盲樣(M164d02A和M164d02B)運(yùn)用酶聯(lián)免疫熒光法、實(shí)時(shí)熒光定量PCR法、基因探針?lè)ê统Ｒ?guī)方法同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)。2.食品單核細(xì)胞增生性李斯特菌污染調(diào)查分析的樣品采集參照GB4789.1-2010《食品

3、微生物學(xué)檢驗(yàn)總則》進(jìn)行，從我國(guó)部分省會(huì)城市（長(zhǎng)沙市、貴陽(yáng)市、成都市和重慶市）各選擇兩個(gè)抽樣點(diǎn)，采集樣本175份。另加貴州省出口辣椒制品120份，總計(jì)295份食品。其中辣椒制品229份、肉及肉制品37份、餐飲食品20份、動(dòng)物性水產(chǎn)品6份、速凍食品3份。參照GB22429-2008對(duì)抽檢樣本行快速篩選，單核細(xì)胞增生性李斯特菌檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性時(shí)，參照GB4789.30-2010進(jìn)行單增李斯特菌分離鑒定確認(rèn)，可疑菌株用API Listeria生化

4、鑒定試劑盒及VITEK2 compact30全自動(dòng)細(xì)菌鑒定分析系統(tǒng)進(jìn)行鑒定，綜合溶血試驗(yàn)的結(jié)果最終鑒定。3.對(duì)3株從食品中檢出的單核細(xì)胞增生性李斯特菌(M164d02A、201105012、201106017)及3株單核細(xì)胞增生性李斯特菌（2010GZYJSZS、201109066、 ATCC-BAA-751）參照 PulseNet推薦方法對(duì)其進(jìn)行PFGE分型。
　　結(jié)果：1.在單核細(xì)胞增生性李斯特菌PEPAS能力驗(yàn)證中四種檢測(cè)方

5、法結(jié)果一致，樣本 M164d02A檢出單核細(xì)胞增生性李斯特菌，樣本 M164d02B未檢出單核細(xì)胞增生性李斯特菌并獲得FEPAS能力驗(yàn)證“Excellent identification”結(jié)果。2.在295份食品中，229份辣椒制品、37份肉及肉制品、20份餐飲食品均未檢出單核細(xì)胞增生性李斯特菌，而在6份動(dòng)物性水產(chǎn)品中檢出1株單核細(xì)胞增生性李斯特菌,在3份速凍食品食品中檢出1株單核細(xì)胞增生性李斯特菌。3.應(yīng)用PFGE方法對(duì)6株單核細(xì)胞增

6、生性李斯特菌進(jìn)行分子PFGE分型，用Quantity one軟件對(duì)圖譜進(jìn)行相似度分析，根據(jù)電泳產(chǎn)生條帶的位置和數(shù)量的不同，共分為6個(gè)不同的型別，相似值在6.8％-73％。
　　結(jié)論：1.4種FEPAS能力驗(yàn)證的檢測(cè)方法均有效檢出單核細(xì)胞增生性李斯特菌，說(shuō)明每一種方法都可有效獲得 FEPAS能力驗(yàn)證。2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明動(dòng)物性水產(chǎn)品和速凍食品存在單核細(xì)胞增生性李斯特菌污染的風(fēng)險(xiǎn)。3.對(duì)6株單核細(xì)胞增生性李斯特菌應(yīng)用PFGE方法進(jìn)行PFG